基因功能研究常用方法.ppt

转基因动物构建过程转基因载体的构建将转基因载体导入受精卵细胞或者胚胎干细胞将转基因受精卵或胚胎干细胞植入假孕小鼠子宫中对转基因动物进行鉴定第31页，课件共66页，创作于2023年2月转基因的技术方法DNA显微注射法克隆法胚胎干细胞技术逆转录病毒介导的基因转移精子载体法等各有优点和缺点，常用的是显微注射和克隆法第32页，课件共66页，创作于2023年2月转基因动物的鉴定Southern杂交确定外源基因的整合以及整合的拷贝数RT-PCR确定外源基因的转录和转录水平Western杂交确定外源基因蛋白质的表达情况实时PCR（荧光定量PCR）第33页，课件共66页，创作于2023年2月转基因技术的应用（1）建立致病基因表达、调控的动物模型（2）动植物新品种的培育（3）各种基因工程产品的制备（4）探讨生殖细胞的基因治疗方法第34页，课件共66页，创作于2023年2月????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????囊性纤维变性是一种遗传病，患者体内会产生粘稠的粘液，阻塞肺部、胰腺和消化器官的内部通道，大约有一半的患者活不过31岁。英国PPT公司培育了植入人体基因的克隆羊，羊奶中含有能够治疗囊性纤维变性的人体蛋白。维尔莫特所在的研究所曾向德国一家药厂出售一头这样的转基因羊，获得50万英镑。第35页，课件共66页，创作于2023年2月核转移技术即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。这样的个体所携带的性状仅来自一个父亲或母亲个体,为无性繁殖.1996年,克隆羊”多莉”的产生成为当年分子生物学发展最重要的事件二、核转移技术第36页，课件共66页，创作于2023年2月???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????克隆羊“多利”第37页，课件共66页，创作于2023年2月第38页，课件共66页，创作于2023年2月基因剔除技术也称基因靶向(genetargeting)灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。第三节、基因剔除技术第39页，课件共66页，创作于2023年2月基因剔除程序将灭活的基因放入胚胎干细胞(ES细胞),使这一灭活的基因通过同源重组取代原有目的基因,筛选到基因定点灭活的细胞后,通过显微注射到小鼠囊胚.细胞在小鼠囊胚参与胚胎的发育,最终形成嵌合体小鼠,由于一部分生殖细胞来源于ES细胞,通过小鼠培养可获得纯合子基因剔除小鼠.第40页，课件共66页，创作于2023年2月基因转移和基因剔除技术在

医学中的应用建立动物疾病可遗传的模型,探讨疾病发生机制①单基因决定疾病模型进行基因剔除以模拟基因失活.单基因疾病模型:地中海贫血,动脉硬化,老年痴呆等②多基因决定疾病模型多基因疾病模型:肿瘤,高血压,糖尿病第41页，课件共66页，创作于2023年2月第四节基因沉默技术第42页，课件共66页，创作于2023年2月基因沉默技术反义(antisen)技术RNA干涉(RNAInterference,RNAi)第43页，课件共66页，创作于2023年2月反义技术反义RNA是根据RNA序列合成的互补RNA,可分为三类:作用于核蛋白体结合位点或与靶mRNA形成双链;作用于非编码区;作用于启动子反义DNA在DNA或RNA水平上以至转录与翻译,其稳定性好,有广泛药用价值核酶是具有酶活性的RNA,参与RNA加工与成熟,人工合成的核酶能抑制特定基因的表达第44页，课件共66页，创作于2023年2月RNA干涉(RNAi)RNA干涉技术是利用体外合成的短双链RNA(21-23nt)抑制细胞内特定基因表达的技术,是转录后基因失活的一种研究基因功能的有力工具机制:第45页，课件共66页，创作于2023年2月RN