哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告.docxVIP

②0.5mol/L乙二胺四乙酸pH8.0(EDTA):

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOII溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取9.31g的Na2EDTA?2H20和1g的NaOH,pH调至8.0,并溶于约401nl水中,定容至50ml

③3mol/L乙酸钠pH5.2(Sodiumacetate)：

溶解20.4g的三水乙酸钠于约40ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到50ml；

④2%十二烷基硫酸钠(SDS)：

称取IgSDS慢慢转移到约含40ml的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至50ml；

⑤40%氢氧化钠(NaOH)：

溶解40g氢氧化钠颗粒于约90ml水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌)，氢氧化钠完全溶解后用水定容至100mlo

⑥lmol/L盐酸(HC1)：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

10mg/ml蛋白酶K(proteinaseK)：

将100mg的蛋白酶k加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

lOmg/mlRnase(无DNase)(DNase—freeRNase)：即无DNA酶的核糖核酸酶

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用lmol/L的Tris—HC1调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)；

(9)1mol/LTris.HC1缓冲液(Tris-HClbufferpH8.0)：

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH(25℃下)加入46ml的浓盐酸,用蒸储水调整终体积至1L；

⑩6X凝胶加样缓冲液：

0.25%浸酚蓝(bromophenolblue)：取60nli双蒸水，将250mg浸酚蓝溶解于其中；

40%(W/V)蔗糖水溶液(sucroseinwater)：在上述溶液中加入40g蔗糖。

另外：

I.100mL5XTBEpH8.0(电泳缓冲液)的配制:

称取5.4gTris,2.75g硼酸加入2mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)溶液中,再用蒸储水补加到100mL

10ml组织匀浆液(装入10ml离心管中)的配制：

lOOmmol/LNaCl：0.2ml(5MNaCl)

25mmol/LEDTA(pH8.0)：0.5ml(0.5MEDTAPH8.0)

lOmmol/LTris.HCIpH8.0)： 0.1ml(IMLTris.HCIpH8.0)

加三蒸水：9.2ml

1ml酶解液(装入1.5ml离心管中)：

200mmol/LNaCl：0.04ml(5MNaCl)

50mmol/LEDTA(pH8.0)：0.1ml(0.5MEDTApH8.0)

20mmol/LTris.HC1(pH8.0)：0.02ml(IMTris.HCIpH8.0)

1%SDS：0.5ml(2%SDS)

200ug/mL蛋白酶K：0.02ml(lOmg/mL)

加三蒸水：0.32ml

W.提取液1：平衡酚(pH8.0)：氯仿：异戊醇(25：24：1)即配即用，每管加500ul

TOC\o1-5\h\z平衡酚(pH8.0)： 250ul

氯仿： 240ul

异戊醇： 10ul

.提取液2：氯仿：异戊醇(24：1)即配即用，每支试管加500ul

氯仿：480ul 异戊醇： 20ul

.TE缓冲液：5ml

lOmmol/LTrisJICKpH8.0)：0.05ml(IMLTris.HCIpH8.0)

Immol/LEDTA(PH8.0)：0.01ml(0.5MEDTApH8.0)

最后加三蒸水至4.94mL4.实验方法步骤及注意事项

1）实验方法步骤：

第一步操作：破碎、酶解细胞（过夜）

⑴取0.2g鼠肝，用冰冷的生理盐水洗3次，然后置于2.0mL匀浆液中，用玻璃匀浆器匀浆至无明显组织块存在（冰浴操作，切勿将细胞破碎，可镜检观察）；

（2）将组织细胞液移至1.5mL离心管中,5000r/min离心30—60s,（尽可能在低温下操作），

弃上清，若沉淀中血细胞较多，可再加入5倍于细胞体积的匀浆液洗一次；

⑶沉淀加400uL无菌水迅速吹散，再加400uL酶解液，翻转混