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细胞毒性实验设计方案

1.准备材料：DMEM(高糖)胰酶双抗(青霉素/链霉素）DAPI

MTT(5mg/mL)DMSOPBS4%多聚甲醛指甲油6孔培养板

96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL)一包0.45

μm滤膜

灭菌：50mL，10mL，5mL离心管两种枪头

2.实验方案

本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅

（SiO2-SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时

夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化硅（SiO2-

SS-HA/DOX）的细胞毒性。实验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，

空白对照组为纯细胞,分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维细胞为正常

细胞模型。

采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO2-SS-HA/DOX、

SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。培养基中含有10%(v/v)FBS和1%(w/v)

双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的SiO2-SS-HA/DOX、SiO2、HA、DOX药物载

体培养基溶液。

(1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型:

培养基的配置：双抗1%血清12%DMEM87%

具体操作步骤：

细胞的复活：

①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37℃温水中，使细胞快速溶解。②将悬浮的细

胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心

去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。（每次转移时，将之前的离心管洗涤，

并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。）

③将培养瓶放入培养箱中培养。

细胞的传代：

将0.25%的胰酶分装至小离心管中，每个管中2mL，冻存于-20℃，每次使用一管，避

免反复冻融。

①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷75%的酒精放入超净台。②将培养液倒入废液

缸，残留培养基用吸管吸干净，操作完成后，培养瓶口

用火烧。

③加入2mL胰酶将瓶底铺满，消化2-3min，于显微镜下观察细胞形态，呈

圆形，即消化完毕，加入2mL12%DMEM终止消化，用枪吹打，使细胞悬浮。

④将细胞悬浮液移入10mL离心管中，1000rmp,5min,离心。⑤迅速倒掉上清，加入

6mLDMEM培养基，分装至两个培养瓶中，再各加入

2mLDMEM，至5mL，于37℃，5%的CO2培养箱中培养48h。

⑥下一次传代步骤同①-⑤。

细胞存活率测定方法（布板，加样）：

①同传代步骤①-④。

②给每个离心管中加入定量的培养基，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀，将所有含

有细胞的培养基转移到一个50mL离心管中，最终使液体体积为30mL。

③96孔板中每个浓度设计5个复孔，每块板设一组空白调零孔，内加培养液，不含

细胞与药物，一组空白对照组，只加培养基和细胞，不加药物。除过空白调零孔，每孔加入

100μL含细胞的培养基。将孔板放入培养