高中生物选修三课件：1.2 基因工程的基本操作程序（一）.pptxVIP

1.2基因工程的基本操作程序（一）

1.2基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取目的基因：能够编码特定蛋白质的基因。

1.2基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、从基因文库中获取目的基因（1）基因文库的概念将含有某种生物不同基因的DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。（2）基因组文库与部分基因文库（如：cDNA）

1.2基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取2、利用PCR技术扩增目的基因（1）PCR的含义：多聚酶链式反应（2）前提条件：（3）PCR的原理：已知部分目的基因核苷酸序列，可以合成引物双链DNA复制（体外）

1.2基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取2、利用PCR技术扩增目的基因（3）PCR的过程变性→复性→延伸→循环(高温)(中温)(低温)

925575℃3`5`5`3`Taq聚合酶引物1引物2原料模板DNA目的基因

925575℃变性3`5`5`3`

925575℃退火

925575℃延伸

925575℃变性

925575℃退火

925575℃延伸

925575℃变性

925575℃退火

925575℃延伸

1.2基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取2、利用PCR技术扩增目的基因（4）PCR的所需条件①酶：________________②原料：________________③模板：________________④能量：________________⑤引物（对）⑥温度与pHTaqDNA聚合酶四种dNTP(dTTP、dATP、dCTP、dGTP）DNA的两条链热能、高能磷酸键中的能量

1.2基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取3、人工合成法（1）化学合成法蛋白质的氨基酸序列→mRNA碱基序列→DNA（基因）的核苷酸（碱基）序列→DNA合成仪合成（2）反转录法基因的mRNAcDNA（基因）反转录需要逆转录酶和DNA合成酶

1.2基因工程的基本操作程序第二步：基因表达载体的构建（核心）（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。

1.2基因工程的基本操作程序第二步：基因表达载体的构建（核心）（2）表达载体的组成启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因（＋复制原点）①启动子：一段特殊的DNA片段，位于目的进的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录成mRNA。②终止子：一段特殊的DNA片段，位于目的基因的尾端，使mRNA的转录终止。

1.2基因工程的基本操作程序第二步：基因表达载体的构建（核心）（2）表达载体的组成启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因（＋复制原点）③标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光蛋白基因，便于检测目的基因是否导入受体细胞。

1.2基因工程的基本操作程序第二步：基因表达载体的构建（核心）单酶切(a酶）用同种限制酶分别切割含目的基因的DNA片段（两端分别切割）和质粒（切割一次）。用DNA连接酶连接。双酶切（a酶和b酶）用两种限制酶分别切割含目的基因的DNA片段（两端分别切割）和质粒。用DNA连接酶连接。aabab标记基因双酶切的优点：①防止DNA连接酶连接时，使目的基因自身环化②防止DNA连接酶连接时，使质粒重新环化③防止DNA连接酶连接时，质粒与目的基因反向（不定向）连接

我们，还在路上……Youmademyday!古人云：“读万卷书，行万里路。”今人说：“要么读书，要么旅行，身体和灵魂总要有一个在路上。”从古至今，学习和旅行都是相辅相成的两件事。。