SN∕T 5124-2019 猪Delta冠状病毒检疫技术规范.pdf

ICS11.220

B41

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T5124-2019

猪Delta冠状病毒检疫技术规范

Quarantineprotocolforporcinedeltacoronavirus

2019-09-03发布2020-03-01实施

中华人民共和国海关总署发布

SN/T5124-2019

目。吕

本标准按照GB/T1.1-2009约州的规则进行编写。

本标准由中华人民共和l国海关总署提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和困杭州海关、中华人民共和因天津海关、中困检验检疫科学研究院、

浙rr.J二学、中华人民共和国昆明海关、中华人民共和国卜海海关。

牛二标准主要起草人：帅江冰、何永强、盼、小金、英虹斐、曾若雪、张晓峰、李肖梁、置，L珍、张永宁、

张舟、花群义、张强、李健。

SN/T5124-2019

猪Delta冠状病毒检瘦技术规范

1范围

本标准规定了猪·Delta冠状病毒分离、RTPCR和l荧光RTPCR珍断技术。

本标准适用于猪Delta冠状病毒感染的临床珍断和｜实验室检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不时少的。凡是注H期的寻｜用文件，仪所注H册的版牛适用于本

文件。凡是不住口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

G8/T6682分析实验室用水规格和I试验方法

3缩略i吾

下列缩Ill各语适用于本文件：

Ct值每个反应管内的荧光信号达到设定的阔值时所经历的循环数

dNTPs脱氧核糖核昔酸

LLC-PK细胞猪肾小管上皮细胞

PDCoVPorcinedeltacoronavirus猪Delta冠状病毒

RT-PCR逆转录－聚合酶链反应

4仪器设备

4.1二氧化碳培养箱

4.2倒置显微镜

4.3PCR仪

4.4荧光定量PCR仪

4.5台式冷冻离心机

4.6生物安全柜

4.7分析天平

4.8微量可调移液器00µ.L、100/.d，、l000/.LL）及配套带滤芯l吸头等。

5试剂和材料

5.1水：本标准所用水应符合GB/T6682中三级水的规格

5.2DMEM/Fl2培养基

5.3氯仿

5.4Trizol

5.5逆转录酶

1

SN/T5124-2019

5.6DNA聚合酶

5.7RNAf悔抑制剂

5.8RT-PCR用引物，序列如下：

上游寻｜物：5-ATCCTCCAAGGAGGCTATGC-3

下游寻｜物：5GCGAATTCTGGATCGTTGTT3

5.9荧光RT-PCR剧引物和探针，序列如下：

上游寻｜物：5-CGACCACATGGCTCCAAl丁C-3

下游寻｜物：5-CAGCTCT’fGCCCATG丁AGCT1斗F

探针：5’FAMCACACCAGTCGTTAAGCATGGCAAGCTAMRAγ

6概述

PDCoV为单股i正链、贪囊膜的RNA病毒，基因细约7-125kb，包含5＇和3’~~编码仄及7个开放性

阅读帽，分别编码多聚酶蛋白（polymeraseprotein)la/lb、纤突（spike,S）蛋白、小膜（Envelope,E）蛋

白、膜（Membrane,M）蛋白、非结构蛋白6(nonstructuralp