分光光度技术.pptVIP

第一章分光光度技术p1分光光度法（Spectrophotometry）：它是根据物质对不同波长的光线具有选择性吸收，每种物质都具有其特异的吸收光谱，而建立起来的一种定量、定性分析的技术。也称为吸收光谱法（Absorptionspectrometry）。它不需要我们把欲分析的样品从混合物中分离开来，即可利用样品特殊的吸收峰或特殊的显色反应，直接进行定性、定量的分析。第一节基本原理一、光的基本知识光是由光量子组成的，具有二重性，即不连续的微粒性和连续的波动性。波长和频率是光的波动性的特征，可用下式表示：λ＝C／υλ为波长，υ为频率，c为光速，等于299770±4km／s。第一节基本原理入射光的强度为Io，通过厚度为L的溶液后，透射光的强度为It，称为透光度（transmittance），用T表示。lg称为吸光度A(AabsorbanceA)，又称为消光度(degreeofextinctionE)或光密度(opticaldensityD)。第一节基本原理二、朗伯一比尔(1ambert—Beer)定律A＝KLC它表示溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。第一节基本原理三、吸光系数吸光系数的物理意义是吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度。1.摩尔吸光系数:指1摩尔浓度的溶液在厚度为1cm时，在某一特定波长下的吸光度，用ε或EM表示。2.百分吸光系数其意义指某物质的1%（W/V）浓度的溶液，在厚度为1cm时，在某一特定波长下的吸光度，用E1%来表示。两种吸光系数表示方式之间的关系是ε＝·E1%第二节分光光度计的基本类型和组件一、分光光度计的基本类型1:单光束分光光度计2:双光束分光光度计3:二极管距阵分光光度计4:双波长分光光度计第二节分光光度计的基本类型和组件一、光光度计的基本类型第二节分光光度计的基本类型和组件二、分光光度计的基本组件（一）光源:常用的有白炽灯（钨丝灯、卤钨灯等），气体放电灯（氢灯、氘灯及氙灯等），金属弧灯（各种汞灯）等多种。（二）分光系统(单色器):有棱镜及光栅两种类型。（三）狭缝:一对隔板在光路上形成的缝隙，用来调节入射单色光的纯度和强度第二节分光光度计的基本类型和组件二、分光光度计的基本组件（四）比色杯:玻璃比色杯用于可见光区，紫外光区要用石英比色杯。标准光径为10mm，还有带有自动进样装置的流动池。（五）检测及显示系统:光电检测器有四种类型：光电池、光电管，光电二极管及光电二极管距阵。第三节分光光度技术的应用一、定量分析1．标准曲线(工作曲线)法2.对比法==，即Cx=×Cs3．计算法C=第三节分光光度技术的应用二、定性分析用分光光度计绘制出样品的吸收光谱曲线。各种物质都有它自己一定的吸收光谱曲线，利用用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。一般情况，单独依靠紫外光吸收光谱不能决定一个未知物质的结构，往往需要与红外、质谱等其它方法相配合。第四节测试条件的选择一、测试波长的选择一般都是选择吸收光谱图中最高峰的λmax作为测试波长。这不仅能获得高的灵敏度；而且由于在λmax附近吸光度随波长的变化较小，入射光波长的稍许偏移和非单色性引起的吸光度变化较小，从而对比耳定律的偏离较小第四节测试条件的选择二、测量狭缝的选择测定狭缝越窄，单色光“越纯”，分辨率越高，但入射光强度也随之变弱，仪器噪声增大，于测量不利。狭缝过宽，单色光的带宽加大，纯度