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实验报告

MTT实验

一、实验原理

MTT全称为3-（4,5）-dimethylthiahiazo（-z-y1)—3，5—di-

phenytetrazoliumromide,汉语化学名为3-(4,5-二甲基噻唑—2)—2,5-二苯基四氮

唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细

胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性

MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细

胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO）能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490

nm。波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内，MTT

结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检

测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的

特点是灵敏度高、经济。

缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不

仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对

实验者也有损害。MTT溶液的配制方法：通常,此法中的MTT浓度为5mg/ml。

因此，可以称取MTT0。5克，溶于100mL的磷酸缓冲液(PBS）或无酚红的培

养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。在配

制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的

日光灯来避光,觉得这样比较好。

需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细

胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光

度最好在0—0.7范围内.MTT一般最好现用现配，过滤后放4℃，避光保存两周

内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融，最好小剂量分

装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在

EP管里，用的时候现配,直接往培养板中加，没必要一下子配那么多，尤其当

MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。

MTT有致癌性，用的时候小心，有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的

MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间

较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉。

配制MTT时用PBS（ph=7。4）溶解。

PBS配方:NaCl8g＋KCl0。2g＋NaHPO1.44g＋KHPO0。24g调pH7。

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4，定容1L。

二、实验目的

1。利用胶束测试细胞毒性(MTT法),选择的细胞为：HeLa细胞、L929细胞和

HepG2细胞，测试48h内不同聚合物胶束浓度下细胞的存活率.

2.制备含有负载不同浓度的DOX药物载体，利用MTT法,选择的细胞为：HeLa

细胞、L929细胞和HepG2细胞，测试48h内负载不同浓度DOX的药物载体细

胞的存活率。

3。对于负载药物的DOX药物载体，利用CLSM(共聚焦激光扫描显微镜），观

察在0。5h,1h,2h，4h,8h细胞中的成像问题。

三、实验方法

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将状态良好的细胞消化，用培养液稀释至3×10cells/mL细胞密度，吹匀后于96

孔板中每孔加入细胞悬液100μL，置培养箱中孵育24h使其贴壁.待细胞贴壁后

加药.本实验中药物溶液与胶束制剂的配制和稀释均用培养液,并用0.22μm滤膜

无菌过滤。受试溶液每孔加入100μL，每个浓度3个平行孔；对照组，即不加

待测药液,单一补加100μL培养液，置培养箱中和细胞共同畔育。于加药后48、

72和96h,将96孔板取出，每孔加