天津大学《生物技术》课件-细胞工程1 .docx

第3章细胞工程

细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的理论与方法，按照人

们的需要，进行大规模的动物细胞和植物细胞或组织培养，以获得

具有药用价值的重组蛋白质和植物次生代谢产物，以及产生新的物种或品质；或在细胞水平上对基因组进行遗传操作，改变细胞的分

化状态及进行基因功能的操作

动物、植物、微生物细胞工程

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原核细胞特点：

原核细胞

细胞小；

DNA裸露于细胞质中；

0.5um细胞内没有膜系构造的细胞器及细胞核；

0.5um

胞外由肽聚糖组成细胞壁。

◆主要代表：

放线菌、细菌、

蓝藻又称蓝细菌、

衣原体、支原体

细胞壁核糖体细胞质

细胞壁

核糖体

原核生物与真核生物

原核细胞

真核细胞

细胞大小

较小

较大

细胞核

无成形的细胞核，核物质集中在核区。无核膜，无核仁。DNA不与蛋白质结合。

有成形的真正的细胞核。

有核膜，有核仁。DNA与蛋白质形成染色体。

细胞质

除核糖体外，无其它的细胞器。

有各种细胞器。

细胞壁

有。主要是肽聚糖。

植物细胞、真菌有，动物细胞无。

代表生物

放线菌、细菌、蓝藻、衣原体

真菌、植物、动物

易于操作3

细胞工程的核心：细胞的全能性

(totipotency)

一个与合子具有相同遗传内容的体细胞具有产生完整生物个体的潜在

能力称之为细胞的全能性。

已分化的植物细胞在合适的条件下具有潜在的发育成完整植株或个体

的能力。

与植物和低等细胞相比，高等动物体细胞的发育潜能有显著差异，早期胚胎细胞具有发育的全能性，但随着分化程度的提高，细胞的发育

潜能也逐渐变窄。4

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细胞工程的基本操作

无菌操作技术：细胞工程的所有实验都必须在无菌条件下进行。

细胞培养技术：动、植物细胞和微生物细胞在体外无菌条件下

的保存和生长。

细胞融合技术：两个或多个细胞相互接触后，其细胞膜发生分子重排，导致细胞合并、染色体等遗传物质重组的过程。

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动物细胞工程

细胞、组织培养

动物细胞融合

单克隆抗体与杂交瘤技术

哺乳动物体细胞克隆

动物细胞制药工程

细胞、组织培养

基本概念：

●动物细胞培养：将动物细胞或组织从机体取出，分散成单个细胞，离散的动物活细胞在体外(模拟体内生长环境)人工无菌、适温和丰富的营养条件下，生长增殖，整个过程中细胞不出现分化，不再形成组织。

●原代培养：从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。原代细胞

●传代培养：细胞由于生存空间或营养障碍等而需从原培养瓶内分离稀

13释后转到新的培养瓶的过程。传代细胞

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●培养细胞类型：悬浮型、贴附型

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CEF:chickembryofibroblast

SPF:specificpathogenfree

动物单细胞的获得：

处死动物，无菌取出组织，剪成1mm2大小

Hanks溶液冲洗，吸管轻轻吹打，低速离心，弃上清

酶消化：胰蛋白酶、胶原酶

实验室中常用的几种细胞系

细胞系名称

细胞类型

来源

3T3

成纤维细胞

小鼠

HeLa

宫颈癌上皮细胞

人

BHK21

成纤维细胞

叙利亚仓鼠

PtKl

上皮细胞

袋鼠

L6

成肌细胞

大鼠

PCI2

嗜铬细胞

大鼠

SP2

浆细胞

小鼠

SP2/0

骨髓瘤浆细胞

小鼠

CHO

卵巢细胞

中国地鼠

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CHO(ChineseHamsterOvary)

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细胞培养技术日益完善，现在已经能够用新颖的微载体等系统对细胞进行大量培养，从而为工业上利用动物细胞培养技术生产疫苗、干扰素、激素和其他免疫试剂等开辟了一

条新路。

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动物细胞培养基

1.水：要求严格

2.氨基酸：12种必需氨基酸、谷氨酰胺等

3.维生素：Eagle最低基本培养基只含B族维生素。其他维生素从血清中

获得

4.无机盐：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、PO?3-、SO?2-、C1-、HCO?;决定培养

基渗透压；悬浮培养要减少钙离子

5.葡萄糖：

6.有机添加剂：复杂培养基中含有核苷、脂类及其他各种化合物

7.激素和生长因素：添加血清即能满足。

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(小牛)血清及其对细胞的作用

血清中含有：

多种蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素、多种金属离子和各种生长因

子、促贴附物质，不明成分

●提供细胞增殖所必须的生长因子

●对细胞附壁有利

●保护作用，解除毒性物质对细胞的毒性作用

●免受冻存，搅拌，损伤

生长液中血清使用浓度为10%～20%,维持液为2%～3%。

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常用培养基

天然培养基、合成培养基、无血清培养基

●天然培养基：主要取自动物体液或从动物组织分离提取的物质，如血清、组织浸液等

优点