两种不同光敏剂介导的光动力治疗对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抑制效果及作用机制研究.docVIP

两种不同光敏剂介导的光动力治疗对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抑制效果及作用机制研究

目的:评估新亚甲基蓝(NMB)及甲基化吗咛硅肽菁(MLSiPcI4)介导的光动力治疗对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抑制效果并探讨其作用机制。方法:1、设置实验组E(有光敏剂有光照,即PS+L+)、单纯光敏剂组PS(有光敏剂无光照,即PS+L-)、单纯光照组L(无光敏剂有光照,即PS-L+)、空白对照组C(无光敏剂无光照,即PS-L-),E及PS组将多重耐药鲍曼不动杆菌与不同浓度的NMB或MLSiPcI4共哺育各30分钟,L与C组以0.9%氯化钠代替光敏剂与多重耐药鲍曼不动杆菌共哺育各30分钟;NMB实验中的E和L组给予波长660nm、能量密度42J/cm~2的红外光照240s;MLSiPcI4实验中的E和L组给予波长660nm、能量密度720J/cm~2的红外光照1200s;PS及C组不给予光照。

各组菌液经连续稀释后各取10μl接种于血琼脂平板培养24h,计算各组菌落数,应用方差分析法分析各组菌落数差异性。2、透射电子显微镜下观察处理后4组细菌的形态学变化。

3、应用相应试剂盒分别检测4组菌悬液中肽聚糖、AKP、镁离子、钾离子的含量,统计学方法分析4组差异性。4、DNA试剂盒提取多重耐药鲍曼不动杆菌的DNA均分为E、PS、L及C4组,E及PS组的DNA与NMB共哺育30分钟,L及C组以1xPBS代替NMB与DNA共哺育30分钟,E及L组给予波长660nm、能量密度42J/cm~2的红外光照240s,PS及C组不给予光照,之后通过凝胶电泳形成条带并分析各组条带差异性。

结果:1、NMB浓度为5μM时,E组的菌落数较其他3组显著减少(E组147±35,PS组318±103,L组349±91,C组336±85,Plt;0.05);NMB浓度为10μM时,E组的菌落数较其他3组显著减少(E组88±39,PS组202±65,L组195±49,C组245±84,Plt;0.05);两种浓度下,PS组、L组、C组3组间菌落数两两比较均无统计学差异(Pgt;0.05);在MLSiPcI4浓度为0.5μM时,E组、PS组的菌落数较L组、C组显著减少(E组16±17,PS组19±14,L组219±166,C组196±120,Plt;0.05);E组与PS组菌落数比较没有统计学差异(p=0.964),L组与C组菌落数比较没有统计学差异(p=0.726);在MLSiPcI4浓度为0.25μM时,4组菌落数两两比较均无统计学差异(Pgt;0.05)。2、透射电子显微镜显示NMB实验中的E组细胞壁结构破坏较其他3组明显。

3、NMB实验中E组菌悬液中肽聚糖含量显著高于其他3组(E组6.8294±1.2456,PS组5.9623±0.9698,L组5.6738±0.7346,C组5.6778±1.0667,Plt;0.05),PS组、L组、C组3组间肽聚糖含量两两比较均无统计学差异(Pgt;0.05);AKP、钾离子、镁离子含量各组差异无统计学意义(Pgt;0.05)。4、凝胶电泳显示NMB实验中E组条带较其他3组模糊,调整灵敏度为75%时,E组条带检测不到,其他三组均显示条带。

结论:1、NMB介导的光动力治疗对多重耐药鲍曼不动杆菌具有体外抑制效果;本研究未发现MLSiPcI4介导的光动力治疗对多重耐药鲍曼不动杆菌具有体外抑制效果。2、NMB介导的光动力治疗通过破坏细菌细胞壁对多重耐药鲍曼不动杆菌起到体外抑制作用;对是否通过直接破坏细菌DNA起体外抑制作用需要更进一步的研究证实。