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LC-MS/MS定量分析流程与经验
国应用生物系统中国公司
应用技术服务部
TechnicalSupport,AappliedBiosystems,China
第一步：Q1Scan——确定母离子的质荷比
●根据待测化合物性质，选择分析的极性(＋/－)、离子化
方式(ESI/APCI)，根据分子量选择扫描范围和时间
●确定母离子的质荷比，准确到小数点后一位。
参数设置：
扫描方式：Q1Scan
质量范围：ParameterRange，100～MW+30，t=1～2sec
CenterWidth，MW±5Da，t=0.5sec
通过手动调节DP、GS1，使喷雾平稳、有效
2Date|ABCONFIDENTIAL2006AppliedBiosystems
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第二步：ProductIonScan——确定子离子的质荷比
●得到高质量的MS2图，母离子的强度为图谱中基峰强度
的1/3到1/4为宜
●平滑后选择子离子质荷比，确定到小数点后一位
参数设置
扫描方式：ProductIonScan
质量范围：ParameterRange，50～MW+10，t=1～2sec
通过手动调节CE
3Date|ABCONFIDENTIAL2006AppliedBiosystems
TechnicalSupport,AappliedBiosystems,China
第三步：优化化合物参数
●根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对
●选择多个离子对时，应合理分配每一对的分析时间
●用“Ramp”，优化Compound项下参数，离子对应
分别设定。
●初步建立MRM方法
●一般优化两次，以得到比较确切的结果
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四步：方法转化：将连续进样方法→LC-MS方法
●关掉所有质谱分析界面，将现有质谱体系灭活，激活液相色谱、
质谱设备。
●单击Acquire中BuildAcquireMethod，打开上面保存过的MRM
方法，添加设备：色谱泵、自动进样器等。
●设置色谱同步。
●设置色谱参数，分析时间一般为0.6～1min，流动相组成和流量
与实际样品分析时相同；修改质谱分析时间，与色谱参数一致；
设置GS1、GS2、TEM初始值，例如分别为40、40、400左右，
保存方法，例如：LC-MRM.dam。
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五步：FIA-优化Source参数
不接色谱柱进行FIA定量优化
●FIA优化前准备：
–将前面用过的样品溶液稀释100～1000倍
–考察溶液浓度与上样量：设置Batch进行
●在Tune项下，双击QuantitativeOptimization，选择
FIA分析，根据向导进行自动优化。
●注意：需要优化的各可选值之间用“;”分隔。
●当对源参数含义及设置比较清楚后，可以省略此步。
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