生物降解试验中接种物活性定量测量方法.docx

JJF1974—2022

1

生物降解试验中接种物活性定量测量方法

1范围

本规范适用于环境风险评估中生物降解试验所使用的接种物活性的定量测量。

2引用文件

本规范引用了下列文件:

JJG196常用玻璃量具

JJF1135化学分析测量不确定度评定

JJF1265生物计量术语及定义

JJF1828ATP荧光检测仪校准规范

HJ/T153化学品测试导则

OECD301化学品测试准则(GuidelinesfortheTestingofChemicals)

ASTMD4012水中微生物三磷酸腺苷(ATP)含量标准检测方法[StandardTestMethodforAdenosineTriphosphate(ATP)ContentofMicroorganismsinWater]

凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本规范。

3术语和计量单位

JJF1135、HJ/T153和OECD中界定的及以下术语和定义适用于本规范。3.1生物降解试验biodegradationtest

评估受试物被接种物(一般含微生物)分解为CO2、水、矿物盐和新的细胞代谢物的能力的试验。

3.2接种物inoculum

生物降解试验过程中用于接种的含有活性微生物的试验生物,包括地表水、生活污水处理厂二级出水、生活污水处理厂活性污泥等中的微生物群落。

3.3微生物群落microbialcommunity

在特定环境下生长的不同种的微生物,在生理和生存过程中具有一定的联系,通过它们之间相互作用,使群体协调发展,并且具有一定功能的微生物的组合。

3.4相对光单位relativelightunit,RLU

三磷酸腺苷(AdenosineTriphosphate,ATP)水解成一磷酸腺苷(AdenosineMonophosphate,AMP)和焦磷酸盐时释放化学能驱动荧光素在荧光素酶催化下氧化释放的光量子数的测量单位。

注:非SI单位,但与ATP浓度成比例关系。不同的检测仪对于同样的样品可能会产生不同的RLU读数。

JJF1974—2022

2

4概述

生物降解性用于评估化学物质与接种物接触表现出被生物降解的潜力,是鉴定化学物质的环境危害性和持久性、进行分类和标签、评价和控制环境风险的基本指标。接种物活性是生物降解性中的主要内容。通过接种物活细胞数量的多寡反映微生物能量代谢的活性,判断其活性是否符合生物降解试验的要求,作为接种物影响生物降解结果的指标。

本规范采用ATP法测量接种物中的活细胞浓度。ATP法是将接种物中的ATP经提取后,测量在氧气、ATP和镁离子同时存在下荧光素酶催化荧光素氧化产生的550nm黄绿色光强度。在一定范围内,光强度与ATP浓度成正比例关系。光强度用发光检测仪(如ATP荧光检测仪、微孔板化学发光检测仪等)测量,结果用相对光单位(RLU)表示。根据相对光单位强度可以推算出接种物中的ATP浓度(nmol/L)。通常每个微生物细胞中的ATP含量相对恒定,约(5×10-16~5×10-15)gATP/cell或

(10-9~10-8)nmolATP/cell,由此可以计算得到接种物中的活细胞浓度。

5测量条件

5.1环境条件

温度:(19~27)℃。

5.2仪器

5.2.1发光检测仪:检测范围不低于4个数量级,线性误差小于10%。

5.2.2移液器:(1~10)μL,(10~100)μL或(20~200)μL,(100~1000)μL各1支。

5.2.3电子天平:分度值为0.01mg。

5.2.4高速大容量离心机:离心力不低于1100g。

5.2.5水分仪:分度值为0.1mg。

5.3试剂

5.3.15-三磷酸腺苷(ATP)二钠盐纯度标准物质(以下简称ATP二钠盐):扩展不确定度≤1%(k=2)。

5.3.2ATP标准工作液:配制见附录A.2。

5.3.3A