HE石蜡切片步骤使用.docx

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石蜡切片制作

一、xx精-伊红对染法

——paraffinsection一、器材及试剂：1.器材：

切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培

养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。

切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。

试剂：

中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

材料：

鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。

二、实验原理：

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.

E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固

定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

三、试剂配法：

1．中性甲醛固定液：

甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度）100mL磷酸氢二钠

6.5

磷酸二氢钾（钠）4g双蒸水900mL

2．xx精、伊红染色液为xx产品

%盐酸乙醇液盐酸1份

70%酒精100份

4．甘油蛋白贴片剂：蛋白50ml

甘油50ml

水杨酸钠（防腐剂）1g

配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂（水杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。

四、实验步骤：

取材

颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。

切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或

10mm×10mm×2mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。注意事项：

取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

固定

将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30－50min。

注意事项：

一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。

有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。

固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。

洗涤

材料经固定后,流水冲洗，数小时或过夜。

脱水

材料依次经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95%、

100%各2次，每次20min。各注意事项：

脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

如需过夜，应停留在70%酒精中。

脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象

透明

纯酒精、二甲苯等量混合液15min，二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ15min（至透明为止）。

由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。

透明注意事项

使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。

更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料块干涸，另一方面能避免吸收湿气。

在透明过程中，如果材料周围出现白色雾状，说明材料中的水未被脱净，应退回纯酒精中重新脱水，然后再透明。

透蜡

放入二甲苯和石蜡各半的混合液