菌种鉴定流程.pptVIP

2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*3.4初步鉴别试验3.4.1革兰染色镜检铜绿假单胞菌为革兰阴性、无芽孢杆菌，单个，成对或成短链排列3.4.2氧化酶试验：铜绿假单胞菌呈阳性3.4.3绿脓菌素试验3.4.442℃生长试验第95页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*3.4.3绿脓菌素试验取营养琼脂斜面培养物接种于绿脓菌素测定用培养基(PDP)斜面上，36±1℃培养24h后，观察斜面有无色素，如有色素，在试管内加氯仿3～5ml，以无菌玻棒搅碎培养基并充分振摇。使培养物中的色素完全萃取在氯仿液内。静置片刻，待氯仿分层，用吸管将氯仿移至另一试管中，加入盐酸试液(1mol/L)约1ml，振摇后静置片刻，如在盐酸液层内出现粉红色、即为阳性反应，无粉红色出现为阴性反应。如培养基斜面无色素产生，应于室温培养1～2天再按上法试验。凡经再次检验，绿脓菌素试验仍为阴性者应继续以下试验第96页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*3.4.442℃生长试验将菌悬液划线接种于营养琼脂斜面上，立即置42±1℃的恒温水浴箱内，务使整个斜面浸没在水浴中，培养24～48h，斜面如有菌苔生长者为阳性反应；无菌苔生长为阴性反应第97页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*4生化试验第98页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*4.1硝酸盐还原产气试验以接种环沾取少许营养琼脂斜面培养物接种于硝酸盐胨水培养基中，置36±1℃培养24h，观察结果。如果在培养基内的小倒管中有气体产生，即为阳性反应，表明该培养物能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。小倒管内无气泡者为阴性反应第99页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*4.2明胶液化试验以接种针沾取营养琼脂斜面培养物少许，穿刺接种于明胶培养基中，穿刺深度应接近培养基的底部于36±1℃培养24h取出放入冰箱内10～30min如培养基呈溶液状，即为明胶液化试验阳性反应；如明胶呈凝固状，为阴性反应第100页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*本试验应注意：(1)本试验接种前，培养基应为固态，否则需将培养基置冰箱内使之凝固后，再穿刺接种(2)试验应同时设未接种细菌的阴性对照管，与试验管同时培养并观察结果第101页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*5结果报告5.1供试品培养物经证实为革兰阴性杆菌，氧化酶试验及绿脓菌素试验皆为阳性者，即报告1g或1ml供试品检出铜绿假单胞菌5.2供试品培养物氧化酶试验阳性，镜检为革兰阴性杆菌的培养物，绿脓菌素试验阴性时，其硝酸盐还原产气试验、41℃生长试验及明胶液化试验皆为阳性时，亦报告1g或1ml供试品检出铜绿假单胞菌5.3凡与5.1与5.2结果不符时报告1g或1ml供试品未检出铜绿假单胞菌第102页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*5.4疑似菌落也可以采用自动化菌种鉴定系统进行菌种鉴定，对疑似菌落如果鉴定为铜绿假单胞菌可以报告从供试品中检出铜绿假单胞菌第103页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*6注意事项第104页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*6.1非典型形态铜绿假单胞菌污染药品后，因生产工艺和药物的影响，在溴代十六烷基三甲胺平板上的菌落形态可产生非典型形态。为防止漏检，在挑取疑似菌落时，宜取2～3个以上菌落，分别进行检验，以提高铜绿假单胞菌的检出率第105页,共124页，2024年2月25日，星期天2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室*6.2绿脓菌素是铜绿假单胞菌鉴定的重要特征，但色素的产生受许多因素的影响，除菌株差异及变异外，培养条件是重要因素，温度、培养基成分等皆可影响色素产生培养基中琼脂、蛋白胨等均应事先测试，选用适宜品牌试验时用阳性菌株作对照试验第106页,共124页，2024年2月25日，星期天