YCT《烟草、烟草种子及烟草制品DNA鉴别检测方法》.docVIP

YC/T××××—××××

Ⅰ

ICS65.160X85YC

ICS65.160

X85

中华人民共和国烟草行业标准

YC/T××××—××××

烟草、烟草种子及烟草制品

DNA鉴别检测方法

DNAIdentificationandDetectionMethodsforTobacco,TobaccoSeedsandTobaccoProducts

（征求意见稿）

××××-××-××发布 ××××-××-××实施

××××-××-××实施

国家烟草专卖局

国家烟草专卖局发布

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由国家烟草专卖局提出。

本文件由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1）归口。

本文件起草单位：国家烟草质量监督检验中心、河南中烟工业有限责任公司、郑州烟草研究院、河南中烟工业有限责任公司、云南省烟草质量监督检测站、玉溪中烟种子有限责任公司、广西中烟工业有限责任公司、山东中烟工业有限责任公司、吉林烟草工业有限责任公司、湖北省烟草质量监督检测站。

本文件主要起草人：刘楠、张威、王英元、何声宝、杨金初、金静静、冯晓民、冯颖杰、张剑锋、张轲、张立猛、罗安娜、邢军、王红霞、孟冬玲、卢彦华、张衍杨、杨明峰、高雨卉、李玉娥、龙杰、张婷、李峰。

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烟草、烟草种子及烟草制品DNA鉴别检测方法

范围

本文件规定了烟草、烟草种子及烟草制品的DNA定性检测方法。

本文件适用于烟草、烟草种子及烟草制品的烟草与非烟草、烤烟与非烤烟的定性检测。

注：本文件烟草种子包括烟草裸种、烟草丸化种子；烟草制品包括卷烟、雪茄烟、烟丝、无烟气烟草制品、烟梗、梗片、梗丝、烟末、初烤烟叶、复烤烟叶。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB2635烤烟

GB5991.1香料烟分级技术要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8966白肋烟

GB/T18771.1-2015烟草术语第1部分：烟草类型与烟叶生产

GB/T19616烟草成批原料取样的一般原则

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

原理

提取试样的DNA，对烟草或烤烟的特异SSR位点进行扩增，通过琼脂糖凝胶电泳来定性判断样品是否有烟草DNA、烤烟DNA。

试剂

水（如无特殊说明，应符合GB/T6682中一级水的规定）。

柱式植物DNA提取试剂盒或等效试剂盒。

乙二胺四乙酸（分析纯及以上）。

乙酸（分析纯及以上）。

TAE缓冲液：每升含4.84gTris-HCl、1.14mL乙酸、100mL0.5MEDTA(pH8.0)。

琼脂糖。

引物对：引物对包含SSR-1/SSR-2、SSR-3/SSR-4，SSR-1、SSR-2用于待检样品的烟草与非烟草检

测，SSR-3、SSR-4用于待检样品的烤烟与非烤烟检测。烟草与非烟草或烤烟与非烤烟检测时，任选一对相关引物，引物对序列见表1。

表1引物序列信息

SSR-1引物序列信息

5′-引物

AAAGCGACATTACGAAACTAGAAA

3′-引物

GGGTTACACTGTCAAGGTCCA

SSR-2引物序列信息

5′-引物

TGCACATAGGAAACACTTTAGTACA

3′-引物

TTGAGATTTGGGTTCTTACCAA

SSR-3引物序列信息

5′-引物

TTGCCACTTGAACTAAGCCC

3′-引物

GGGAGCAAAGTACCATATCAAA

SSR-4引物序列信息

5′-引物

TCAAGATCTGATCACCAACACC

3′-引物

ACATTGAATTGGGCGTGAAT

仪器设备

PCR扩增仪。

天平，感量0.0001g。

离心机，转速不低于13000r/min。

凝胶电泳仪。

超微量紫外分光光度计。

凝胶成像系统。

抽样

样品信息的收集

收集的信息资料为纸质或电子版信息，包括：介绍信、送样人信息、样品信息（包括样品包装状态）。

样品数量

7.2.1烟草裸种每个送检样品最小质量不低于25g，烟草丸化种子每个送检样品最小质量不低于120g。

7.2.2烟草及烟草制品实验室样品的质量不低于1千克或者5个包装单位。

试样的制备

7.3.1若为烟草种子，从实验室样品中随机抽取不少于300粒种子，作为试样。

7.3.2若