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- 2024-04-10 发布于广东
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在免疫诊断试剂的开发过程中,蛋白质的交联是一项关键技术,它可以用于稳定蛋白质结构、改善蛋白质免疫原性、实现蛋白质之间的有效偶联等。下面我们来具体看下常用的交联基团以及交联方法。
常用交联基团:
氨基(-NH2):蛋白质分子中的赖氨酸残基提供了丰富的伯胺,它们可以与含有活化羧基的交联剂反应。
羧基(-COOH):蛋白质的C端和其他羧酸基团经活化后可与胺类交联剂反应。
巯基(-SH):半胱氨酸残基上的巯基可以与含有活性基团的交联剂如马来酰亚胺基团反应。
醛基(-CHO):醛基可以与氨基进行醛胺缩合,带醛基的化合物与带氨基的化合物通过醛基与亚氨基缩合成希夫碱而进行共价交联。
羟基(-OH):蛋白质中的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸等氨基酸残基含有羟基,可以与其他分子形成氢键或参与形成酯键、醚键等。
咪唑环(Imidazole环):蛋白质中的组氨酸残基含有咪唑环,咪唑环上的氮原子可以与金属离子或其他带正电的基团形成配位键。
常用交联方法:
非共价交联:非共价交联这种方法不形成稳定的共价键,而是通过弱的相互作用如氢键、范德华力、疏水作用或静电作用来连接蛋白质。常见的非共价交联方式为酶联免疫吸附测定(ELISA)中反应板的包被,这种方式最大的缺点是不稳定,并且容易出现大量的非特异性吸附,形成高本底。
共价交联(化学修饰):共价交联是一种化学过程,涉及两个或多个分子通过共价键的形成而相互结合。这种结合通
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