维生素C含量测定方法.pptVIP

差示旋光法1）标准溶液的配制准确称取维生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的维生素C标准溶液。2）比旋光度与溶液pH值的关系量取10.0mL维生素C标准液于50mL量瓶中,用水稀释至50mL。测定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体(每次约50mg),每次溶解后,测定一次溶液的pH及其旋光度,得到维生素C溶液的pH及旋光度关系第21页,共33页，2024年2月25日，星期天差示旋光法选定pH为2.2和6.2第22页,共33页，2024年2月25日，星期天2）差示旋光度与溶液浓度关系吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(△a)。文献结果：线性方程为△a=0205*C+0．05，r=0．99643）辅料干扰试验取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。第23页,共33页，2024年2月25日，星期天4）稳定性试验同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。文献结果：差示旋光度基本不变5）回收率试验精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。文献结果：平均回收率为97.8％，变异系数cv为1.03％第24页,共33页，2024年2月25日，星期天6）样品测定取维生素C片剂10片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc20mg/mL)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。第25页,共33页，2024年2月25日，星期天薄层扫描法维生素C具有较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。第26页,共33页，2024年2月25日，星期天（1）试纸的制备2,6-二氯靛酚钠(DCP-Na)溶于无水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙醇溶液，滤纸在盛有DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。第27页,共33页，2024年2月25日，星期天（2）缓冲溶液的配制称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M氢氧化钠420ml，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的pH应为3.5。否则，用酸或碱调整pH值，保存于冰箱中。3）扫描条件确定在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照品进行扫描，维生素C在290nm处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择?1=290nm，?2=420nm．双波长反射式锯齿扫描。第28页,共33页，2024年2月25日，星期天4）线性实验4.1）对照品溶液的配制精密称取维生素C标准品100mg，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。4.2）测定用5?l定量毛细管，分别吸取上述溶液各5?l，点于试纸上。点样后晾干，并将试纸固定在20cm×20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定△A的积分值(峰面积)作为纵坐标Y，点样量为横坐标X，得一直线方程Y=15692X+130225，r=0．9991第29页,共33页，2024年2月25日，星期天5）样品的含量测定取维生素C片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生素C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用5?l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上，然后扫描测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维生素C含量。第30页,共33页，2024年2月25日，星期天6）回收率实验精密称取维生素C对照品20mg，其它原辅料适量，置10ml容量瓶中