磷酸盐缓冲液配制方法.docxVIP

实验方案镧铈对铜胁迫下豌豆种子萌发和生长的影响1.La(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发影响的显效剂量筛选(1)浓度梯度设计：

LaCl/CeCl

3

溶液配置：先配置1g?L-1的LaCl/CeCl

3 3

溶液母液，然后将母液分别稀释

3

成浓度为5、10、20、40，60mg?L-1梯度浓度，调节PH（HCL/NAOH）至6.5，对照(CK)

为PH调节至6.5的去离子水。

重金属Cuso浓度的设置：10、25、50、100、200、400mg?L-1，对照用蒸馏水。

4

(2)试材培养

种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl

2

溶液消毒15min，分别用自来水和

去离子水洗净，常温下晾干备用。

实验设置：CK，La，Ce，Cu（共4组18个浓度57个样品）

试材处理：

、选取LaCl

、

3

CeCl

3

和CuSO

4

各个梯度溶液溶液，豌豆种子经预处理后用各个梯度溶液

浸没处理，对照用蒸馏水，置于25±1℃浸种24h后，将处理后种子均匀排列在直径9cm、

垫有2层滤纸的培养皿中，每处理加入一定量水培养（以没过种子2/3为标准），每处理3

皿重复，每皿20粒。指标测定方法：

种子发芽第三天测α—淀粉酶，第四天测发芽势，前三天测发芽指数和发芽率，第五天测量根长、茎长，第六天测根系活力、叶绿素含量、可溶性蛋白质、可溶性糖、SOD、POD、CAT、MDA.

2．La(Ⅲ)和Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发及保护酶的影响

(1)试材培养

种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl

2

溶液消毒15min，分别用自来水和

去离子水洗净，常温下晾干备用。

实验设置：在上一步骤中分别筛选出LaCl、CeCl

3 3

的低剂量、适宜剂量、高剂量

三个有效浓度和CuSO的一个有效浓度，分别记为A1，A2，A3；B1，B2，B3；C。

4

实验步骤：有以下几组：

A+C:A1+C、A2+C、A3+CB+C:B1+C、B2+C、B3+C

A+B+C：A1+B1+C、A1+B2+C、A1+B3+C、A2+B1+C、A2+B2+C、A2+B3+C、A3+B1+C、A3+B2+C、A3+B3+C

酸盐缓冲液（PBS）配制方法

磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）

pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.2M NaH2PO4/ml7.0 61.0 39.0

7.7 89.5 10.5

7.8 91.5 8.5

Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/LNa2HPO4·12H2O分子量＝358.22 0.2M溶液含71.64g/L

NaH2PO4·H2O分子量＝138.01 0.2M溶液含27.6g/LNaH2PO4·2H2O分子量＝156.03 0.2M溶液含31.21g/L

0.01MPBS

PBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)

PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L

称7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L。保存于4℃冰箱中即可。

母液的配制：

0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水

0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的

Na2HPO4,即可。

然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：

0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。

MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。

MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另PH值的