益肾排石方的指纹图谱及功效关联物质的作用机制.docxVIP

第11期1558?1571第40

第11期1558?1571

第40卷

2023年11月

CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY

DOI：10.19894/j.issn.1000-0518.230165

益肾排石方的指纹图谱及功效关联物质的作用机制

刘忠义1刘聪1马永璠1赵威1刘艳华2初洪波2*

1（长春中医药大学药学院，长春130117）

2（长春中医药大学附属医院，长春130021）

摘要应用液质联用技术分析了益肾排石方中的化学成分，建立高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱，结合生物信息学技术对关键成分、关键靶点和通路进行了预测分析。应用超高效液相串联质谱技术（UHPLC-MS/MS）对益肾排石方中的化学成分进行了鉴定。10批益肾排石方样品，应用HPLC建立指纹图谱，标记共有峰，进行共有峰归属，并进行相似度评价。应用生物信息学技术，基于指认出的成分，建立了“中药-成分-靶点”网络图，通过GEO数据库获得了肾结石相关的差异基因。对方中功效关联物质的作用机制进行了进一步的分析，并进行了分子对接验证。通过数据库匹配、元素组成和碎片结构分析，共从益肾排石方中鉴定出32种成分；在对10批益肾排石方的指纹图谱的建立过程中，通过对照品指认确定了王不留行黄酮苷、松脂醇二葡萄糖苷、虎杖苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、芦丁、木蝴蝶苷A、大黄酸、异橙黄酮、芦荟大黄素、白杨素、大黄酚、厚朴酚、大黄素甲醚、汉黄芩素和大黄素17个共有峰，10批益肾排石方相似度结果均在合理范围内，且17个共有峰均能归属到虎杖、黄芩、牛膝、柴胡、金钱草、枳实、大黄、厚朴、杜仲和王不留行10味中药。结合生物信息学筛选了ESR1和PTGS1为关键基因，与17种药效成分进行分子对接验证，预测大黄酸和王不留行黄酮苷为关键成分。关键词益肾排石方；液质联用技术；高效液相色谱；指纹图谱；相似度评价；生物信息学

中图分类号：O629.9文献标识码：A文章编号：1000-0518（2023）11-1558-14

益肾排石方以国医大师任继学教授“益肾通腑”学术思想为指导，由金钱草、鸡内金和牛膝等13味中药组成，具有益肾清利湿热、散瘀通淋排石的功效，治疗肾结石的疗效显著。肾结石患者众多，根据中药复方多成分-多靶点-多通路的特点，建立全面阐述益肾排石方有效成分、作用靶点和通路的方法具有

重大的临床和社会意义［1-3］。

近年来，针对中药复方有效成分和作用靶点的分析，一般应用超高效液相串联质谱技术（UHPLC-MS/MS）进行成分鉴定；应用网络药理学技术从系统层次、生物层次等整体角度出发阐明中药复方治疗疾病的作用机制；应用GEO数据库中真实临床数据筛选疾病相关差异基因靶点［4］；应用分子对接技术对有效成分和关键靶点进行对接验证［5］。特别是应用指纹图谱分析中药复方中所包含的化学信息，因其综合、可量化地鉴定中药的化学成分，并能评价中药及制剂整体性和稳定性的特点，成为近年来研究的热点［6］。

本研究的创新性在于组合应用了上述方法，从串联质谱鉴定的有效物质基础出发，建立了益肾排石方的高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱；从中药复方与病证的关联机制出发，将分子对接验证与GEO数据库、SwissTargetPrediction数据库和TCMSP数据库相结合，结合文献的研究方法［7］，预测分析了治疗肾结石的关键成分、关键靶点和通路，为益肾排石方质量控制提供参考，也为其临床治疗肾结石奠定理论基础和科学依据。

1实验部分

1.1仪器和试剂

ThermoVanquish型超高效液相色谱仪（UHPLC，赛默飞世尔科技公司）；Q-ExactiveHF型高分辨质谱仪（HRMS，赛默飞世尔科技公司）；TGL-16M型离心机（长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有

2023-06-05收稿；2023-10-08接受

吉林省自然科学基金（No.YDZJ202201ZYTS237）和吉林省科技发展计划项目（No.20200404068YY）资助

*E-mail：7377023@qq.com

第11期刘忠义等：益肾排石方的指纹图谱及功效关联物质的作用机制