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高效液相法测药品中甲硝唑的含量

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作者：张巍等

来源：《黑龙江水产》2013年第2期

张巍1刘万学2李宁1彭玮1

（1.哈尔滨市兽药饲料监察所黑龙江哈尔滨150070）

（2.黑龙江省水产技术推广总站黑龙江哈尔滨150018）

摘要：采用高效液相色谱法（HPLC）测定甲硝唑片的含量，本法具有简便、快速、准确等优点，可用于甲硝唑片含量的测定。

关键词：高效液相色谱法、甲硝唑片、含量测定、注意事项

1引言

甲硝唑（MetronidazoleTablets）（化学名称：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇）

甲硝唑在水产养殖生产上常被用于治疗鱼类的几种滴虫感染。但甲硝唑存在致癌性和致遗传变异等毒副作用，因此，许多国家禁止其在动物源性食品中使用，规定在所有食品动物可食性组织中最高残留限量（MRL）为零。我国农业部（2002年农业部第227号公告）也有同样规定。建立针对这种违禁兽药的简单、便捷、灵敏的检测方法非常必要。甲硝唑片的常规检测方法为高效液相色谱法，参照标准《中国药典》2010年版二部。

2实验部分

2.1仪器与试剂

高效液相色谱仪，泵1525，紫外检测器2487，自动进样器（Waters公司）；AB265-S电子天平（Mettler公司）；AR2140D电子天平（赛多利斯公司）；101A-0S电热恒温鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；甲醇（Fisher公司）和水（由Millipore公司超纯水器制得）为色谱试剂；甲硝唑标准品（含量100%，购自中国药品生物制品检定所）。

2.2色谱条件及测定法

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20:80）为流动相；检测波长320nm。取甲硝唑片20片，精密称定，研细，精密称定细粉约0.3425g（约相当于甲硝唑0.25g），置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀虑过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10PL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甲硝唑对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.25mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积，即得。

3注意事项与结果

3.1注意事项

对照品的干燥：甲硝唑对照品来源于中国药品生物制品检定所，为《中国药典》

2010年版收载的对照品。对照品的说明书要求该对照品使用前应预先在105°C干燥2小时。如果使用的对照品未按规定进行干燥或暴露在湿度较高的环境中，有可能导致样品的检测结果偏高。

对照品的称取量：甲硝唑对照品的称取量在10mg?25mg之间，在此称量范围，应使用精度为0.01mg的天平。若天平精度不能满足要求，可能会由于称量误差影响到对照品溶液浓度的准确性，给测定结果造成偏差。

样品的处理：甲硝唑片20片，精密称定，片剂重量差异应使用精度为0.1mg的天平，经测定其平均片重为0.2740g，研细备用。按照检测方法的规定，在甲硝唑样品溶液制备时，精密称取研细的样品粉末适量，用50%甲醇振摇使溶解，再定容至50ml。实验室若用超声促使甲硝唑溶解。样品超声溶解后溶液温度升高，应冷却至室温再稀释定容至刻度，否则可能导致检测结果偏高。超声时间不宜过长，以免局部温度过高可能会引起甲硝唑降解。

样品液的滤过也是影响检测结果的关键步骤，由于溶剂中甲醇含量较高，若过滤速度太慢，可能会由于甲醇的挥发导致甲硝唑测定结果偏高。可以采取静置后滤过，或使用有机微孔滤膜过滤。

3.1.4.环境湿度的影响：在取样、称量等过程中应对环境湿度进行控制。若环境湿度较高，可能导致样品吸湿而影响检测结果的准确性。

3.1.5.检测结果还会受到其他一些因素的影响，如色谱条件。检测方法规定的色谱条件中对柱温没有明确要求，绝大多数实验室使用的柱温在25C?35C之间，图谱显示甲硝唑的分离状态良好，保留时间适中（4?10分钟之间）。

3.2测定结果

对照品精密称定：标（1）12.50mg，标（2）12.52mg分别置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀定容，设定高效液相色谱仪流速1ml/min，精密量取10^1，注入液相色谱仪，记录色谱图，系统适用性试验其理论板数（按甲硝唑峰计算）为8126（应不低于2000），重复性为0.1%（取对照溶液，连续进样5次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%），对照品峰面积：（1）7648133.710，（2）7654977.679；对照品12.50mg时相当的峰面积平均值为7645441.495，样品分析在8min内完成。

样品精密称定：样品（1）0.34262g，样品（2）0.24267g，分别置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解