氧化石墨烯-DNA纳米探针用于三磷酸腺苷的检测与药物递送.docxVIP

第1期118?127第41

第1期118?127

第41卷

2024年1月

CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY

DOI：10.19894/j.issn.1000-0518.230012

氧化石墨烯-DNA纳米探针用于三磷酸腺苷的检测与药物递送

张越梁蕊赵灿男李春梅*

（西南大学药学院，重庆400715）

摘要癌细胞内三磷酸腺苷（ATP）浓度异常与肿瘤发生发展过程密切相关，因此，快速、准确地检测细胞内外ATP水平具有重要意义。盐酸阿霉素（DOX）是一种广泛使用的抗癌药物，能嵌入DNA碱基对，并通过抑制DNA复制和转录诱导细胞凋亡。氧化石墨烯（Grapheneoxide，GO）由于具有毒性低、比表面积大和易功能化，可以有效、稳定地负载DNA纳米探针进入细胞等优点而被广泛应用。然而，复杂环境中的生物分子容易通过物理吸附竞争性结合到GO表面，导致假阳性信号。基于此，提出了一种新型的GO-DNA纳米探针，并将其应用于ATP的检测与抗癌药物DOX靶向递送。以ATP的核酸适配体与其互补链杂交形成双链DNA（dsDNA），并通过G-C碱基对负载DOX，利用互补链延伸的polyA序列吸附到GO表面构建了GO-dsDNA-DOX纳米探针，能极大程度地降低复杂环境中物理吸附引起的干扰，减少假阳性信号产生。ATP与适配体特异性结合会导致DOX释放，根据其荧光“off-on”实现ATP的定量分析，DOX荧光强度与ATP含量在0.08~8.0mmol/L范围内呈现良好的线性关系，线性方程为IF=3.0897c+129.08，检测限（3σ/k）为0.059mmol/L，且方法具有良好的选择性和抗干扰能力。细胞毒性及荧光成像结果表明，负载DOX的纳米探针在人乳腺癌细胞（MCF-7）内有明显的药物释放，显著诱导细胞凋亡。该研究建立了一种免修饰、简单和快速的ATP含量检测分析方法，并利用癌细胞内高浓度ATP实现靶向药物递送，降低了对正常细胞的毒副作用，为癌症的治疗提供了新思路。

关键词三磷酸腺苷；DNA纳米探针；氧化石墨烯；荧光检测；盐酸阿霉素；药物递送

中图分类号：O655文献标识码：A文章编号：1000-0518（2024）01-0118-10

三磷酸腺苷（ATP）是生物体内重要高能磷酸化合物，是细胞主要的能量来源［1］。每种生物体内的ATP的含量一般均在某一范围内，ATP的异常浓度通常与不正常的生理活动有关［2］。因此，肿瘤细胞内高浓度的ATP可以作为重要的生物标志物，为肿瘤早期诊断和及时治疗提供有用的工具［3］。例如，正常人体内ATP浓度通常小于0.4mmol/L，而恶性肿瘤患者体内因异常的细胞增殖与细胞代谢，肿瘤细胞内的ATP浓度可达到1.5~15mmol/L［4］。化疗药物发挥药效使癌细胞凋亡，癌细胞内ATP释放至胞外使细胞外ATP浓度升高，因此，通过对ATP的动态监测可以对药物或生物活性物质发挥作用效果进行评估，开发一种简便、灵敏、快速和高效的ATP检测新方法具有重要意义。传统用于ATP含量检测的方法主要有生物发光法［5］、高效液相法［6］、毛细管电泳法［7］和质谱法［8］等。这些方法往往操作繁琐、耗时长、特异性与灵敏度较低，且需要裂解细胞后提取ATP进行含量分析，难以实现活细胞内ATP的原位动态监测。随着科学的不断进步，越来越先进的检测方法不断涌现出来，如电化学分析法［9］、拉曼光谱法［10］、化学发光法［11］和荧光法［12］等。其中，荧光法不仅具有操作简单、快速和灵敏度高等优点，而且能用于活细胞的ATP动态成像分析，在生化分析领域已得到广泛应用［13］。核酸适配体是一种特殊类型的单链DNA或RNA，能够折叠成高度特异的结构，并且可以与特定的靶分子，如金属离子、生物小分子和蛋白质等特异性结合［14］。由于具有合成简单、易修饰及长期稳定性等独特的优点，且对特定的生物标记具有可调节的亲和力，核酸适配体已在生物传感、医学成像和疾病治疗等领域得到了广泛的研究［15］。Liu等［16］通过简便的一锅合成法成功构建了适配体sgc8c修饰的DNA四面体纳米结构（s-TDN），用于将盐酸阿霉素（DOX）靶向传递到高表达PTK7的白血病细胞CCRF-C