3.2基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

第2节基因工程的基本操作程序;学习目标;预习案·自主学习;一、基因工程的基本操作程序

1.的筛选与获取。

2.的构建。

3.将目的基因导入。

4.目的基因的。;二、第一步:目的基因的筛选与获取

1.目的基因:主要是指的基因。培育转基因抗虫棉时,用到的目的基因是基因。

2.获取方法

(1)筛选合适的目的基因:从相关的?

的基因中进行筛选。;(2)利用PCR获取和扩增目的基因。;90;三、第二步:基因表达载体的构建

1.基因表达载体构建的目的:使目的基因在受体细胞中

,并且,同时使目的基因能够。这一步是培育转基因生物的

。;2.基因表达载体的组成;3.基因表达载体的构建过程

首先用一定的限制酶切割载体,然后用同种或?

的限制酶切割含有目的基因的DNA片段,再利用酶将目的基因片段拼接到载体的切口处,从而形成重组DNA分子(如图)。;四、第三步:将目的基因导入受体细胞;受精卵;五、第四步:目的基因的检测与鉴定;六、DNA片段的扩增及电泳鉴定

1.原理

(1)实质:体外进行DNA片段的扩增。

(2)PCR利用了,通过调节温度来控制DNA双链的。;(3)电泳的原理:DNA分子具有可解离的基团,在一定的pH下,这些基团可以带上。在电场的作用下,这些带电分子会向着的电极移动。

(4)琼脂糖凝胶电泳的原理:在凝胶中DNA分子的迁移速率与、DNA分子的等有关。凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为的紫外灯下被检测出来。;2.方法步骤;(1)目的基因主要是指编码蛋白质的基因,如与生物抗逆性、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。

()

(2)引物使DNA聚合酶能够从引物的5′端开始连接脱氧核苷酸。()

提示:引物使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。;(3)表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原点。()

提示:表达载体的复制启动于复制原点,基因的表达启动于启动子。

(4)将基因表达载体导入动物受精卵常用显微注射法。

()

(5)将目的基因导入双子???植物一般采用农杆菌转化法。

();(6)转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定必须通过分子检测才能达到目的。()

提示:应通过个体生物学水平鉴定。

(7)为培育抗除草剂的作物新品种,导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体。()

提示:将外源基因导入植物细胞时,受体细胞可以是体细胞、受精卵。;(8)检测目的基因是否成功表达可用抗原—抗体杂交技术。()

(9)在凝胶中DNA分子的迁移速率只与DNA分子的大小相关。()

提示:在凝胶中DNA分子的迁移速率与DNA分子的大小、凝胶的浓度、DNA分子的构象等有关。;(10)电泳鉴定PCR产物时,应在每个加样孔中加入等量的PCR产物与凝胶载样缓冲液的混合液。()

提示:电泳鉴定PCR产物时,应在一个加样孔中加入指示分子大小的标准参照物,其他加样孔中加入等量的PCR产物与凝胶载样缓冲液的混合液。;探究案·互动探究;资料:如图是利用PCR技术筛选和扩增目的基因的图解。;(1)PCR模拟了细胞内的哪一生理过程?

提示:DNA分子的复制。

(2)什么是引物?

提示:引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。

(3)引物的作用是什么?引物为什么是两种?

提示:使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。DNA两条反向平行的单链都可作为模板且碱基序列不同。;(4)PCR过程中两种引物的碱基序列能否互补?说明理由。

提示:不能。因为两种引物分别与两条DNA单链的3′端互补结合,如果两种引物的碱基序列互补那么会影响引物与DNA单链的结合。

(5)PCR过程中需要解旋酶吗?所需要的DNA聚合酶应具有什么特点?

提示:PCR过程中,DNA双链解开是在高温下完成的,不需要解旋酶;由于PCR过程温度较高,所以需要能耐高温的DNA聚合酶。;(6)PCR扩增目的基因需要知道目的基因的全部核苷酸序列吗?

提示:不需要,只要知道目的基因两端的部分核苷酸序列即可(以便根据这部分序列合成两种引物)。

(7)某