3.2 基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

基因工程的基本操作程序授课教师：沈垚

知识回顾限制性内切核酸酶（限制酶）重组DNA技术的基本工具DNA连接酶载体“分子手术刀”“分子缝合针”“分子运输车”

从社会中来普通棉花转基因抗虫棉将苏云金杆菌中的Bt抗虫蛋白基因转入普通棉花1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？

转基因抗虫棉培育过程苏云金杆菌目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定（核心）

一、目的基因的筛选与获取1.目的基因（1）定义：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等相关的基因。根据不同的需要，目的基因不同，主要是指编码蛋白质的基因。如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因

一、目的基因的筛选与获取思考：1.Bt抗虫蛋白的抗虫原理是什么？当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响。2.抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？

一、目的基因的筛选与获取非编码区非编码区启动子：RNA聚合酶的识别和结合位点开始转录编码区（1）原核生物基因终止子：终止转录非编码区组成：编码区上游与编码区下游功能：不能编码蛋白质，调控遗传信息的表达(如启动子、终止子）。编码区：编码蛋白质的合成1.拓展：基因的结构

一、目的基因的筛选与获取非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点外显子内含子12345加工mRNA前体成熟mRNA不能编码蛋白质的序列=内含子+非编码区序列12345（2）真核生物基因转录

一、目的基因的筛选与获取【总结】原核细胞与真核细胞的基因结构比较原核细胞真核细胞不同点编码区是的编码区是间隔的、的相同点都由能够编码蛋白质的和具有调控作用的区组成的连续不连续编码区非编码（2）编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？（1）非编码序列：包括非编码区和内含子【思考】

一、目的基因的筛选与获取2.目的基因的获取方法（1）从生物组织中直接获取①从供体细胞直接获取目的基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。这种方法犹如用猎枪发射的散弹打鸟，无论哪一颗弹粒击中目标，都能把鸟打下来。②鸟枪法的具体做法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别构建表达载体，然后通过载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫作扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的细胞分离出来，如许多抗虫、抗病毒的基因都可以用该方法获得。③用“鸟枪法”获取目的基因的缺点是工作量大，具有一定的盲目性。

一、目的基因的筛选与获取2.目的基因的获取方法（2）通过构建基因文库来获取目的基因（主要指cDNA文库）基因文库基因组文库部分基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。①建立基因组文库某生物所有DNA特定的限制酶基因组所有基因每个基因和载体结合重组DNA分子导入受体菌基因组文库

一、目的基因的筛选与获取2.目的基因的获取方法（2）通过构建基因文库来获取目的基因（主要指cDNA文库）基因文库基因组文库部分基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。②建立cDNA基因文库某种生物的成熟mRNA单链DNA双链DNA片段（cDNA）导入受体菌中储存cDNA文库逆转录酶DNA聚合酶与载体连接

一、目的基因的筛选与获取部分基因文库和基因组文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子（非编码区）基因中内含子基因多少小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因使用cDNA文库获得目