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寄生蜂鉴定DNA条形码方法

1范围

本文件描述了采用DNA条形码方法进行寄生蜂鉴定的方法原理、仪器设备、试剂与实

验准备、鉴定步骤、结果判定。

本文件适用于寄生蜂成虫及其标本“种”的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

寄生蜂Parasitoidwasp

营寄生习性的膜翅目Hymenoptera昆虫的统称。

3.2

DNA条形码DNAbarcoding

生物体内用于物种鉴定的一段标准的、易于扩增的相对较短的DNA片段，可用于生物

的识别与鉴定。

3.3

种Species

在自然界能够交配、产生可育后代，并与其他物种存在生殖隔离的群体。

3.4

1

聚合酶链式反应polymerasechainreaction;PCR

用于扩增位于两段已知序列之间DNA的分子生物学技术。

3.5

引物primer

与特定DNA片段两端序列互补的人工合成的寡核苷酸短片段，用于PCR过程。

3.6

Phred质量分数Phredqualityscore

评估测序反应准确性的质量指标，表示碱基信号错误概率。

3.7

序列相似度sequencesimilarity

两条序列相似的残基与相同的残基的数目占总长度的百分数。

4方法原理

DNA条形码方法根据种间变异大于种内变异的基本原理，从待检寄生蜂样本中获取特

定基因区段（如COI基因）的DNA序列，通过测序并与已知物种的数据库进行比对，实现物

种的快速、准确鉴定。

5仪器设备、试剂与实验准备

5.1仪器设备

5.1.1鉴定工具：解剖镜、光学显微镜等。

5.1.2低温高速离心机：离心力在10000rpm以上，温控低至4℃。

5.1.3微量分光光度计：测量体积最小1L，波长范围包括230nm、260nm和280nm。

5.1.4PCR仪。

5.1.5核酸电泳仪。

5.1.6凝胶成像系统。

5.1.7超净工作台：平均风速为0.25~0.6m/s。

5.1.8超低温冰箱：最低达-80℃。

5.1.9冰箱：温度范围为-20℃~4℃。

5.1.10天平：精度为0.0001g。

5.1.11恒温水浴锅：工作范围为30℃~70℃。

2

5.2主要试剂

5.2.1DNeasyBloodTissueKit：QIAGENGmbH生产。

5.2.2超纯水ddHO：符合GB/T6682标准。

2

5.2.3乙酸（CHO）。

242

5.2.4三羟甲基氨甲基甲烷（CHNO）。

4113

5.2.5乙二胺四乙酸（EDTA）。

5.2.6PCR缓冲液。

5.2.7电泳缓冲液TAE（由CHNO、EDTA和CHO组成）。

4113242

5.2.8核酸染料。

5.2.9TaqPCRStarMix。

6鉴定步骤

6.1通则

实验过程符合GB19489的规定；DNA提取和PCR扩增遵照WS/T230的要求。

6.2取样

样本经冷冻或乙醚麻醉，至于灭菌的洁净1.5mL离心管中。如长期不用需放置在无水乙

醇内-20℃保存。普通样本需去除腹部组织，珍稀样本取对称一侧组织（如单侧寄生蜂足）。

6.3DNA提取

6.3.1试剂盒法

采用DNeasyBloodTissueKit试剂盒，按说明书进行。

6.