食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时PCR法.docx

SN/T2051—2008

食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法

1范围

本标准规定了食品、化牧品和饲料中牛、羊(绵羊和山羊》、猪源性成分实时PCR检测方法。本标准适用于食品、化救品和饲料中牛、羊(绵羊和山羊》、猪源性成分的鉴别检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—1992,neqISO3696:1987)GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义、缩略语

下列术语和定义，缩略语适用于本标准。

3.1术语和定义

3.1.1

牛源性成分bavine-derivedmaterials

牛种属特异性DNA片段。

3.1.2

羊源性成分wine-derivedmaterials

羊种属特异性DNA片段。

3.1.3

猪源性成分porelne-deriselmaterlals

猪种属特异性DNA片段。

3.1.4

实时荧光PCRreal-timefluoresentPCR

实时荧光聚合酶链式反应。

3.1.5

Ct值CyclethresholdCt

每个反应管内的荧光信号达到设定的阀值时所经历的循环数。

3.2缩略语

3.2.1

DNAdeoxyrilbonuleieacid

脱氧核糖核酸。

3.2.2

PCRpolymerasechainreaction

聚合酶链式反应。

2

SN/T2051—2008

3.2.3

TaqThermnsaquaticu

水生栖热菌。

3.2.4

FAM6-carboxyfluorescein

6-羧基荧光素，

3.2.5

ROX5-carboxy-X-rhodamine

6-羧基-X-罗丹明。

3.2.6

HEX5-hexachloro-fluorescein

6-羧基-2”,4,4,5°,7,7六氯荧光素。

3.2.7

COXICytochromeCoxidasesubunitI

细胞色素C氧化酶亚单位I。

4原理

本标准采用TanMan实时荧光PCR技术，根据线粒体DNA(COX1)基因上动物种间多态性的差异而进行动物源性种类鉴定。本标准应用多色荧光检测技术，采用多重PCR方法。牛、羊，猪源性成分单体系检测时，对反应液中含有的两种不同荧光染料进行双通道同步检测，在同一反应管内对牛或羊或猪的COX1基因及内参照反应同时进行扩增，并通过标记两种不同荧光物质(FAM、HEX)的特异性探针进行特异性杂交，两色荧光同步检测：牛羊源性成分混合体系检测时，对反应液中含有的三种不同荧光染料进行三通道同步检测，在同一反应管内分别对牛、羊特异的COXI基因及内参照(Internal

Control)同时进行扩增，并通过标记三种不同荧光物质(FAM、HEX、ROX)的特异性探针进行特异性杂交，多色荧光同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。

5材料与试剂

5.1设备和材料

5.1.1实时荧光PCR检测系统。

5.1.2高速台式冷冻离心机(最高转速12000r/min以上)。

5.1.3台式离心机(最高转速2000r/min)

5.1.4振荡器。

5.1.5冰箱(2℃~8℃和-20℃或-80℃)。

5.1.6微量可调移液器及配套吸头(10μL、100gL.、1000μl)。

5.1.7实时荧光PCR反应管。

5.1.8离心管

5.1.9水浴槽。

5.1.10加热器。

5.1.11可移动紫外灯。

5.1.12磁力架。

5.2试剂

除特别说明以外，所用试剂均为分析纯，水为按照GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无

DNA酶污染的容器分装。

SN/T2051—2008

5.2.1基因组DNA提取试剂盒”,组成，功能及使用注意事项参见附录A。

5.2.2牛源性成分实时荧光PCR检测试剂盒”:组成、功能及使用注意事项参见附录B。

5.2.3