微生物制片显微观察及检测技术.ppt

微生物检测技术介绍检测技术的重要性第32页,共54页，2024年2月25日，星期天革兰氏染色镜鉴按照标准进行传统的生化反应鉴定API试剂条菌鉴定国际金标准半自动细菌鉴定仪（ATBExpression）全自动细菌鉴定仪（VITEK2）微生物鉴定MiniVIDAS筛选系统免疫凝集/免疫沉淀实验微生物检测实时荧光定量PCR色谱、光谱分析技术分子生物学技术一、微生物检验技术介绍传统筛选系统第33页,共54页，2024年2月25日，星期天微生物的检测技术c)酶联免疫荧光技术d)实时荧光定量PCRe)免疫磁珠技术b)乳胶凝集反应a)常规培养鉴定法—显色培养基法第34页,共54页，2024年2月25日，星期天

显色培养基

显色培养基检测基本原理：利用不同种属细菌代谢所产生的酶的特异性，在培养基中加入相应的特异性酶底物和抑制剂，当具有某特异酶的细菌与酶底物作用时，使显色基团游离出来附着于菌落上，形成颜色独特的菌落。根据菌落的颜色直接对菌属（种）作出鉴定。第35页,共54页，2024年2月25日，星期天

GB4789-2008、2010

中新技术的应用-显色培养基

沙门氏菌志贺菌副溶血性弧菌O157：H7大肠埃希菌单增李斯特菌阪崎肠杆菌大肠杆菌计数第36页,共54页，2024年2月25日，星期天显色培养基的优势快速、简便、节省时间-大多数显色培养基只需在样品增菌后，分离培养18~24h，即可根据菌落的颜色作出初步的鉴定。（阴性-弃去；阳性-进一步鉴定）。结果直观，一目了然（根据颜色判定结果）。灵敏度高、特异性强，大大减少了后续的鉴定步骤（确证试验）。第37页,共54页，2024年2月25日，星期天显色培养的缺陷假阳性：97%的大肠埃希菌含有β-葡萄糖苷酶，约10%的沙门氏菌属中也含有此酶。假阴性：O157：H7大肠埃希菌没有β-葡萄糖苷酶，在MUG-LST上呈阴性反应。不是所有具有特征性酶的微生物均在含底物的培养基中呈阳性反应。提示：这是任何选择性培养基都无法避免的问题。与普通选择性培养基比较，显色培养基的假阳性、假阴性的机率相对要低得多。第38页,共54页，2024年2月25日，星期天

乳胶凝集反应

原理：乳胶凝剂试验是以乳胶微粒为载体的间接凝集试验。用人工方法将抗体包被于与免疫无关的大分子聚苯乙烯或羧化聚苯乙烯乳胶颗粒上。利用抗原抗体特异性结合的特性，当敏感的乳胶颗粒与待检细菌菌悬液混合后，迅速形成肉眼可见的凝集团块，用于筛选可疑菌。第39页,共54页，2024年2月25日，星期天

常用Microgen乳胶凝集试验盒

李斯特菌（listeria）沙门氏菌（salmonella）弯曲杆菌（camylobacter）大肠杆菌O157（E.coliO157）军团菌（legionella）葡萄球菌（staph）第40页,共54页，2024年2月25日，星期天

观察凝集结果第41页,共54页，2024年2月25日，星期天全自动荧光免疫分析仪(VIDAS-mini或30)检测项目：食品及环境中常见致病性细菌（李斯特菌属、单核增生李斯特菌、弯曲菌属、大肠埃希菌O157、沙门氏菌属、葡萄球菌肠毒素检测）的快速筛检第42页,共54页，2024年2月25日，星期天全自动荧光免疫分析仪(VIDAS)原理：?以免疫技术捕获目标微生物，应用酶联免疫法，最后测蓝色荧光（ELFA）。包被针上有抗体包被，所测得的荧光与标本中抗原的含量成正比。特点：结果准确：对每个标本做两次免疫反应，保证结果的可靠。灵敏度比可见光方法高出1000倍。已获得美国FDA、日本厚生省、AOAC、USDA、中国进出口商品检验局等政府及权威机构认可。可同时进行12个相同或不同的测试。每天进行约60—80项测试特异性强：标本不需分离出目标微生物即可上机检测。避免交叉污染：没有采样针，避免标本之间交叉污染；样品不与仪器接触，仪器内没有抽吸样品的管路，杜绝了标本对环境的污染第43页,共54页，2024年2月25日，星期天荧光定量PCR聚合酶链式反应技术（PCR）是分子生物学技术最具有代表性的技术。它是一种能在体外将微量生物DNA分子进行数百万倍放大的新型检测技术。荧光定量PCR技术在普通PCR技术基础上，通过荧光染料的结合，将检测信号进一步放大，其灵敏度是普通PCR的几百倍，扩增和检测过程由仪器自动完成，检测同量高，速度快除去样品前增菌时间，2-4小时内可得到检测结果微生物检测限可能达到1copy，抗杂菌干扰能力强第44页,共54页，2024