小鼠骨髓细胞的染色体制备.ppt

小鼠骨髓细胞的染色体制备实验目的与要求掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目，并验证实验小鼠的雌雄。实验原理秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤体的形成，把分裂的细胞阻截在中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型的形态和特征。通过对小鼠骨髓细胞的低渗、滴片、染色等处理，可观察小鼠染色体。低渗使细胞膨胀，染色体松散；高空滴片时染色体进一步完全散开；再通过冷热处理；使细胞膜及核膜破裂。实验材料、器材和所需药品健康小白鼠（雌雄均可）、解剖刀、解剖盘、解剖剪、镊子、吸管注射器（5-10mL）、离心管（10mL）、烧杯（100mL）、37℃恒温水浴锅、普通离心机、显微镜、1:10的Giemsa磷酸盐缓冲液、秋水仙素（浓度为0.01%）、KCl（浓度为0.075mol/L）、生理盐水(浓度为0.85%)、固定液（甲醇：醋酸=3:1）、冰冻载玻片、吸管、量筒、酒精灯、吸水纸、擦镜纸实验步骤预处理→取股骨→冲洗骨髓→离心→低渗→离心→固定→离心→滴片→染色→观察

实验方法秋水仙素注射：选择健康的小白鼠（约20g重），在实验前约2-3h，按2-4ug/g体重的剂量经腹腔注射秋水仙素。断颈法处死小鼠。2、取股骨：用解剖剪刀剪取小鼠大腿骨，用剪刀剔除掉肌肉（尽量剔除干净！）。3、低渗：将剔除掉肌肉的2个腿骨放于培养皿（盛有预先于37℃温育的2mL的KCl溶液）中，用剪刀将腿骨剪碎（尽量剪得很碎！），然后低渗处理15min。4、将低渗后的上清液（不要骨头）倒入离心管，再加入1mL固定液，平衡后放入离心机，以1500r/min离心6min。5、第一次固定：弃上清，沉淀再加入3mL固定液，吹打匀，静置固定10min，平衡后放入离心机，以1500r/min离心6min。6、第二次固定：弃上清，再加入3mL固定液，吹打匀，静置固定10min，平衡后放入离心机，以1500r/min离心6min。7、制备细胞悬浮液：弃上清，将上清液倒尽，加入0.5mL固定液，用枪吹打开。8.滴片：用镊子取预先冰冻的干净载玻片，用吸管将溶液迅速滴上2-3滴细胞悬浮液，立即用另一载波片将溶液展开，使细胞分散均匀，然后晾干，或置酒精灯上微微加热干燥。共滴2张片。9、染色：将晾干后的载波片滴加染色液2-3滴覆盖样品、染色15min。10、染色后,水洗，凉干后即可镜检。。11、镜检：在低倍镜下找到中期分裂相的细胞，转用高倍镜，选择染色体分散适度、长度适中的分裂相进行观察。