多聚酶链式反应扩增片段经典版.ppt

靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’TaqDNA聚合酶PCR循环第三步：引物延伸第32页,共33页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第33页,共33页，2024年2月25日，星期天****关于多聚酶链式反应扩增片段经典版DNA指纹法在案件侦破中有重要作用，刑侦人员通过案发现场的血液、头发等样品中提取的DNA，与犯罪嫌疑人的DNA进行比较，就由可能为案件的侦破提供证据。讨论：1.犯罪嫌疑人留在现场的样品一般都是极少量的，刑侦人员要怎样才能得到足够量的DNA呢？2.你还能说出DNA鉴定技术在其他方面的应用吗？第2页,共33页，2024年2月25日，星期天★分子生物学研究中最强大的实验技术之一★其本质是在体外模拟细胞内DNA分子复制的过程美国科学家穆利斯(K.B.Mullis)发明了PCR技术1993年诺贝尔奖第3页,共33页，2024年2月25日，星期天（一）DNA分子的结构C、H、O、N、P1.元素组成：脱氧核苷酸2.基本单位:一、基础知识脱氧核苷酸脱氧核苷磷酸脱氧核糖含氮碱基嘌呤嘧啶腺嘌呤（A）鸟嘌呤（G）胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（T）第4页,共33页，2024年2月25日，星期天一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二酯键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’，5’-磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端3.脱氧核苷酸链的形成脱氧核苷酸链结构简图第5页,共33页，2024年2月25日，星期天DNA分子的平面结构ATGCAGCT氢键5端3端5端3端识别：-OH端为3′;磷酸基团的末端为5′。第6页,共33页，2024年2月25日，星期天4.DNA分子的双螺旋结构⑴.DNA分子是由的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’－3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则结构。⑵.与交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；排列在链的内侧。⑶.两条链上的碱基通过连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与配对，一定同胞嘧啶配对。双螺旋两条反向平行脱氧核糖磷酸碱基氢键胸腺嘧啶鸟嘌呤第7页,共33页，2024年2月25日，星期天（1）DNA分子是由的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’－3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则结构。4.DNA双螺旋结构特点：（2）与交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；排列在链的内侧。（3）两条链上的碱基通过连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤（A）一定与配对，鸟嘌呤（G）一定同配对。两条反向平行双螺旋脱氧核糖磷酸碱基氢键胸腺嘧啶（T）胞嘧啶（C）第8页,共33页，2024年2月25日，星期天（二）DNA的复制：1.概念：由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。2.时期：有丝分裂间期，减数第一次分裂前的间期。3.场所：细胞核（主要）、线粒体、叶绿体4.基本条件：酶:解旋酶、DNA聚合酶能量:ATP原料:四种脱氧核苷酸模板:DNA的两条链第9页,共33页，2024年2月25日，星期天5.复制特点：a.边解旋边复制b.半保留复制6.遵循原则：碱基互补配对原则7.精确复制的原因a.规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板b.碱基互补配对保证了复制准确无误的进行8.复制的意义:DNA分子通过复制将遗传信息从亲代传给了后代，保持了遗传信息的连续性。第10页,共33页，2024年2月25日，星期天参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物总结：细胞内DNA复制的基本体系打开DNA双链提供DNA复制的模板合成子链的原料催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸第11页,共33页，2024年2月25日，星期天解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打开DNA双链模板合成子链的原料催化子链合成使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸思考：