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生化工程实验
课程编号:14120207005
适用专业:生物技术
学时数:48
学分数:1.5
一、实验目的与要求:
《生化工程实验》是生物技术专业必修课。本课程主要阐述如何从生物材料(动物、植物、微生物等)获取纯净、完整而有活力的生物大分子,以供对其结构与功能进行深入研究,从而揭示各种生命现象的本质。通过本课程的学习,使学生掌握如何从生物细胞分离纯化得到相关的生物大分子。不仅要使学生掌握一系列分离纯化技术而且要掌握纯度鉴定技术。主要介绍各专项技术的原理,同时也介绍操作要点及技巧,为学生从事分子水平的生物产品纯化研究奠定良好基础。
本课程设计思路是以蚯蚓为材料,提取、纯化纤溶酶,最终得到电泳纯级的纯品,并对其纯度、性质进行鉴定,展开各项实验,将各个实验组织为一个完整的技术体系;使同学们都感到他们正在进行一项科研课题,更能激发同学们的学习兴趣,使学生在掌握操作技能的同时,更培养他们的科研思路和创新意识。
二、实验项目与提要:
序号
实验项目
必做
选做
时数
内容提要
实验
类型
每套仪
器人数
1
生物大分子的抽提与沉淀技术
必做
3
1.采用机械法将蚯蚓进行破碎。
2.选择适宜的缓冲液提取粗酶液
3.盐的选择
4.盐浓度的确定
5.盐析
6.沉淀蛋白的收集
综合性
2
2
脱盐
必做
3
1.透析法
(1)对透析袋进行选择和处理。
(2)将蛋白质沉淀装入透析袋中。
(3)在水或缓冲液中进行透析。注意更换外液
2.凝胶层析法
(1)选择并处理凝胶。
(2)装住
(3)点样
(4)层析
(5)收集样品、处理样品
综合性
2
3
离子交换层析
必做
6
1、离子交换剂选择和处理
2、装柱与平衡
3、样品的处理与上样
4、洗脱
5、样品的收集和处理
综合性
2
4
凝胶层析
必做
6
1、选择并处理凝胶。
2、装住
3、点样
4、洗脱
5、收集样品、处理样品
综合性
2
5
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
必做
6
1、配制连续或不连续凝胶管或凝胶板
2、点样
3、电泳
4、染色及测活
5、鉴定和制备
综合性
4
6
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(测定纤溶酶的分子量)
必做
6
1、配制连续或不连续凝胶管或凝胶板
2、点样
3、电泳
4、染色
5、鉴定
综合性
4
7
等电聚焦(IEF)
必做
6
1、制备PH梯度凝胶(PH=3—7)
2、准备电极缓冲液
3、加样
4、聚焦
5、样品组分的检测
综合性
4
8
WesternBlotting
必做
12
1.?配制不连续凝胶
2.?电泳
3.?转膜
4.?一抗孵育
5.?二抗孵育
6.?显影
综合性
4
三、成绩考核方法
1.平时成绩:占总学分10%(包括出勤、课堂提问、讨论情况等)。
2.实验成绩:占总学分60%(包括出勤、实验报告等)。
3.考试成绩:占总学分30%
4.综合考核成绩:100%
四、教材及主要参考书:
教材:
《现代生物技术概论》,何忠效等,北京师范大学出版社,北京,1999。
主要参考书:
[1]《酶学研究技术》,张树政等,科学出版社,北京,1987。
[2]《色谱法》,林卓坤,科学出版社,北京,1984。
[3]?《电泳》(第二版),何忠效,张树政,科学出版社,北京,1999。
[4]《现代生化技术》,郭永,华南理工大学出版社,广州,1996。
[5]《生化实验方法和技术》,张龙翔等,科学教育出版社,北京,1997
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