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人巨细胞病毒PP65基因的原核表达及初步应用开题报告

一、研究背景和意义

人巨细胞病毒（CMV）是广泛分布于全球范围内的一种重要病毒，被认为是免疫功能受损患者最常见的病原体之一。CMV感染可以引起全身各个系统及器官的不同程度的病变，包括视网膜炎、肺炎、脑炎、肝炎等。据世界卫生组织统计，约有60%的人在一生中感染过CMV，感染后病毒可以在体内潜伏多年，甚至终身持续存在，而无明显症状。

在临床上，CMV感染常常被忽略或者漏诊，尤其是在免疫功能低下患者中更为常见。因此，对CMV的快速、准确检测具有重要意义。PP65（protein65）作为CMV的主要结构蛋白，被广泛应用于CMV的诊断和治疗监测。传统的PP65抗原检测方法需要使用放射性同位素或者荧光物质作为探针，操作复杂且费时费力。因此，研究开发一种高效、准确的PP65检测方法具有极大的意义。

二、研究内容和方法

本研究旨在构建PP65基因原核表达系统，并初步应用于CMV感染的检测。具体来说，研究内容包括以下三个方面：

1.构建PP65基因表达质粒：将PP65基因克隆至表达质粒pET-28a(+)中，构建PP65基因原核表达质粒。

2.原核表达PP65蛋白：利用大肠杆菌BL21(DE3)转化构建好的表达质粒，诱导PP65蛋白的原核表达，纯化蛋白。

3.初步应用于PP65抗原检测：采用Westernblotting方法检测表达的PP65蛋白，对其进行鉴定并评估其在CMV感染检测中的应用价值。

三、预期结果和意义

本研究将实现PP65基因的原核表达和蛋白的纯化，并初步评估其在CMV感染检测中的应用价值。该研究将为开发一种新型的PP65抗原检测方法提供基础技术支持，有望用于CMV感染的快速、准确诊断，从而提高CMV感染诊断的准确性和敏感性，对于免疫功能低下患者的监护和治疗具有重要意义。