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各种组织匀浆样本用于ELISA检测的处理方法
大鼠肺组织匀浆制备过程：
1.WB法：在组织匀浆器中加入大鼠肺和5体积的匀浆缓冲液进行匀浆，4摄氏度下
3000转离心20分钟后，收集上清。用CmassiePlusPrteinAssay测定总蛋白浓度.
用等量的样本buffer与20微克样本混合(100mMTris-HCl,2%SDS,0.02%溴酚蓝,和
10%甘油煮几分钟之后电泳.
EILSA：肺用5体积的buffer进行匀浆，缓冲液由10mMHEPES,10mMKCl,0.5M
蔗糖,1mMEGTA,1mMDTT构成。匀浆组织在750xg下离心10分钟分理出细胞核.
含有细胞质部分的上清液储存在–70摄氏度冰箱用于MIP-2蛋白质测定.
2.BAL液收集后,收集左肺做TNF-alpha,MIP-2,和移行蛋白表达评估.肺用1mL细
胞裂解液在匀浆器中进行匀浆。得到的组织匀浆在10000Xg下离心10分钟.上清液储存
在–80摄氏度留用于后面的检测。
3.冻存的的组织样本称重加入匀浆缓冲液（4摄氏度，每100毫克组织中加入1毫升
缓冲液），样本进行匀浆和一次冻融,超声10分钟后在4摄氏度孵化一个小时。最终得到的
组织匀浆在120,000xg下离心.组织上清液用于细胞因子测定，这些数据用每毫克组织
表达。
4.取三分之一冻存的来源于？在4摄氏度细胞裂解液中孵化1小时的肺进行匀浆，组
织匀浆之后超声并在4摄氏度12,000转下离心10分钟.ELISA检测TNF-alpha,
MIP-2,andIL-6的组织匀浆的内容。组织匀浆总蛋白采取Bradfrd法.
大鼠脾和肺组织匀浆制备过程：
TNF-alpha检测脾和肺组织匀浆过程：冰冻组织样本称重后匀浆（每100毫克组织1
毫升缓冲液）。匀浆后的组织进行一轮冻融后，超声10分钟在4摄氏度下孵化一小时。之
后120,000xg下离心，上清液用于细胞因子测定。数据用pg/mg蛋白表达，蛋白质浓
度测定法用Lwry法。
大鼠肝脏组织匀浆制备过程:
TNF-alpha检测肝脏组织匀浆过程:动物杀死后用快速切除肝脏，用缓冲液冲洗，匀浆。
之后超声10分钟。组织匀浆12,000xg下离心10分钟，用ELISA测定上清液中的
TNF-alpha量。LPS致死量：15mg/kg.
IL-6检测肝脏组织匀浆过程：在干冰上将肝脏切成500mg每片，之后放入2ml冰的
磷酸缓冲盐中，在冰上对组织进行匀浆，用同样的溶液稀释至5ml，组织匀浆在1500xg下
离心15分钟，澄清的上清液等分成1ml储存在-70摄氏度留作后用。
大鼠肝脏和肺的匀浆过程:
0.1g肝脏或肺的样本，用1ml冰的Tris细胞裂解液进行匀浆，之后2100rpm离心
20分钟。
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