呼吸系统疾病动物模型.pptVIP

二、肾上腺素诱发家兔肺水肿模型[操作方法]家兔2.5~3kg。家兔耳缘静脉缓慢注射0.1%肾上腺素1.0ml/kg体重。解剖可见肺脏明显肿大、膨隆、淤血、出血,切面有粉红色泡沫样液体溢出。肺湿重和肺系数可增至正常对照的2~3倍或以上。间质和肺泡内充满富含蛋白的水肿液,肺不张,萎陷,出血。第53页,共81页，2024年2月25日，星期天第六节肺纤维化动物模型第54页,共81页，2024年2月25日，星期天肺纤维化（pulmonaryfibrosis）是多种原因引起慢性肺疾病的共同结局，是呼吸衰竭的主要病理基础，其病理改变过程是肺部炎症导致肺泡持续性损伤，经反复破坏、修复、重建，最后引起细胞外基质过度沉积。第55页,共81页，2024年2月25日，星期天[造模原理]博莱霉素(bleomycin)致肺纤维化的机制迄今未明，可能与自由基损伤、免疫机制和胶原调节失调等有关,其中自由基损伤可能是主要机制,活性氧造成急性肺泡炎,进而发展为肺纤维化。第56页,共81页，2024年2月25日，星期天[实验动物]体重200g左右的SD或Wistar大鼠。[主要试剂]博莱霉素,用生理盐水配成4mg/ml溶液.立式照明灯或额戴式喉镜；斜端聚乙烯塑料管(作为气管插管用)。第57页,共81页，2024年2月25日，星期天[操作步骤]1.乙醚麻醉后,仰位以上门齿为悬挂点使大鼠斜挂在60°鼠台上,颈前放置照明灯第58页,共81页，2024年2月25日，星期天2.垫小块纱布将鼠舌拉出,用压舌板压住舌腹,趁动物吸气瞬间迅速将平端聚乙烯塑料管(连1ml注射器,内盛博莱霉素NS溶液)通过声带开口插入气管4~5cm,用棉絮试验导管是否进入气管,确定后缓慢注入博莱霉素溶液,剂量为5mg/kg(0.25ml/只)。3.注入药物后将动物直立搓动旋转,尽量使药液在肺内分布均匀。4.注入药液后3、7、14和28d处死动物,收集肺标本,部分用于检测肺羟脯氨酸含量等,部分用中性福尔马林固定,常规石蜡切片,HE(苏木精-伊红)和结缔组织染色。第59页,共81页，2024年2月25日，星期天[结果]注入药液后3d和7d表现为肺明显急性炎症,肺间隔水肿,炎症细胞浸润,以嗜中性粒细胞和单核巨噬细胞为主,伴有轻度出血。14d肺脏系数(肺重/体重)增加,肺泡壁肺泡巨噬细胞、淋巴细胞等炎症细胞明显减少,成纤维细胞增多,肺泡隔明显增宽,有胶原沉积,呈斑片状纤维化改变。28d时肺组织结构破坏,肺泡腔明显缩小,部分肺泡塌陷或消失,肺间质出现大量胶原纤维和成纤维细胞,形成弥漫性肺纤维化。第60页,共81页，2024年2月25日，星期天[模型评价]1.博莱霉素是多肽类抗肿瘤药物,单次气管内注入可复制出与人类肺纤维化相似的动物模型,具有操作简便、造模稳定的优点,是目前最常用的肺纤维化动物模型。2.适当掌握麻醉深度,气管插管操作应熟练,否则可能造成咽喉、声带损伤。3.除前述的气管插管外,也可在麻醉下,切开颈前皮肤分离气管,用4号针头在气管环状软骨之间刺入气管内注药,这在小鼠较为常用.也可采用经鼻吸入的方法.第61页,共81页，2024年2月25日，星期天4.用博莱霉素也能在仓鼠、小鼠等动物诱发肺纤维化,基本方法与大鼠模型相同.小鼠博莱霉素的用量同大鼠,但也可用2.5mg/kg体重.5.也可用6~8周龄雄性ICR小鼠，经鼻滴入博莱霉素3mg/kg体重，可制备与气管内直接给药同样的肺纤维化模型，给药2周时出现明显肺纤维化。此方法对动物损伤小，死亡率低。第62页,共81页，2024年2月25日，星期天第七节肺结核病动物模型第63页,共81页，2024年2月25日，星期天目前，全球结核病(tuberculosis)疫情呈明显上升趋势。在全球所有传染病中,结核病已成为成年人的首要死因。在我国结核病流行形势也十分严峻，防治任务艰巨。第64页,共81页，2024年2月25日，星期天结核结节第65页,共81页，2024年2月25日，星期天一、小鼠模型?[实验动物]体重16~20g小鼠,雌雄各半,同批实验体重差别不超过2g。[操作步骤]1.临用前,取在改良的罗氏培养基生长2周的强毒人型结核杆菌(H37RV)的表面膜状物,称重,研磨后用NS配制含1~5mg/ml(湿重)的菌液。第66页,共81页，2024年2月25日，星期天2.给小鼠尾静脉注射上述菌液0.2