培养基及配制.ppt

pH值在灭菌之前培养基的pH值一般都是调节到5.0-6.0。一般来说，当pH值高于6.0时培养基将会变硬；低于5.0时，琼脂不能很好地凝固。pH值对不同植物的影响会有差异，如玉米胚乳愈伤组织在pH值7.0时鲜重增加最快，在pH值6.1时干重增长最快。第32页,共62页，2024年2月25日，星期天种类最适pH值种类最适pH值杜鹃4.0月季5.8越桔4.5胡萝卜、石刁柏6.0蚕豆5.5桃7.0番茄5.7??不同植物对培养基最适pH值的要求不同(见表)第33页,共62页，2024年2月25日，星期天二、培养基的制备第34页,共62页，2024年2月25日，星期天1水和药品水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水或重蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。第35页,共62页，2024年2月25日，星期天药品：应选取等级较高的化学纯（CP）或分析纯(AR)；药品的称量一定要准确、正确，防止药勺之间的交叉污染。第36页,共62页，2024年2月25日，星期天2.1母液（贮备液，stocksolution)配制的目的1）方便配置其他培养基；2）保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取3）便于低温保藏。2.2母液配制方法（1）单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。（2）混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混合母液.2培养基母液的配制和保存第37页,共62页，2024年2月25日，星期天（3）一般原则：一般母液配成比所需浓度高10-1000倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和SO42-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。母液配好后放冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。第38页,共62页，2024年2月25日，星期天（4）母液配制的药品与器材1）药品：配制MS培养基所需的药品、生长调节物质、蒸馏水、1mol/L的NaOH，1mol/L的HCl2）器材：各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、母液瓶、标签、冰箱等。第39页,共62页，2024年2月25日，星期天（5）母液配制（以MS培养基为例）有机物母液铁盐母液无机大量母液无机微量母液激素母液第40页,共62页，2024年2月25日，星期天配制MS培养基时母液的计算第41页,共62页，2024年2月25日，星期天A无机大量母液(扩大10倍配1L)成分硝酸钾

硝酸铵硫酸镁

磷酸二氢钾氯化钙称量工具托盘天平百分电子天平注意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解，再进行混合，而且钙盐最后缓慢加入进去。第42页,共62页，2024年2月25日，星期天硼酸，硫酸铜，硫酸锰，硫酸锌，氯化钴，钼酸钠，碘化钾万分电子天平B无机微量母液（扩大100倍配1000ml）称量工具成分第43页,共62页，2024年2月25日，星期天C铁盐（扩大100倍1000ml）铁盐硫酸亚铁，Na2-EDTA注意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。在装有800ml蒸馏水的烧杯中加入2粒氢氧化钠。溶解后加入3.73gEDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢慢加入2.78gFeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至1000ml，置于冰箱中备用。第44页,共62页，2024年2月25日，星期天D有机物（扩大50倍500ml）有机物甘氨酸VB1VB6烟酸肌醇注意：有机物中的物质均采用电子天平称取。第45页,共62页，2024年2月25日，星期天E激素母液（常用的）生长素NAA，IBA，2,4-D，IAA细胞分裂素6-BA，KT，GA，ZT注意：这些激素配制时，一般配成0.2-1mg/ml，NAA、IBA、IAA一般可先用少量无水乙醇助溶。2,4-D也可用0.1mol／L的NaOH或KOH助溶，细胞分裂素类一般先用少量0.1mol／L盐酸溶解后，再加入温水冷却后定容。第46页,共62页，2024年2月2