3.1 重组DNA技术的基本工具高二下学期生物人教版选择性必修三.pptx

第1节重组DNA技术的基本工具第三章基因工程

日本核污水日本核污水本月已陆续到达我国海域，对我们会有怎样影响？日本在2023年8月24日正式启动福岛核污染水排海，并已完成四批次排放。短短半年时间，已有超过3万吨核污染水流入太平洋。而这只是个开始。根据东电公布的最新计划，2024年度拟分7次排出5.46万吨核污染水，是2023年度的约1.7倍。如何直观准确检测水体被污染的程度？/video/BV1Zx4y1e7Ky/?spm_id_from=333.337.search-card.all.click

日本核污水如何直观准确检测水体被污染的程度？利用水生生物进行水生环境毒性测试

基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程师在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。别称操作对象、水平【思考】荧光斑马鱼的制备流程？

荧光斑马鱼的制备荧光水母DNA剪取GFP基因（绿色荧光蛋白基因）导入斑马鱼问题1：如何剪取GFP基因？问题2：如何将GFP基因导入斑马鱼？

问题1：如何剪取GFP基因？资料1:20世纪60年代，阿尔伯等人发现外来噬菌体难以侵染大肠杆菌，这一现象称为限制。研究表明，这一现象是大肠杆菌的限制酶切割噬菌体DNA所致。此后，人们陆续发现了多种限制酶。探究限制酶的作用机理

问题1：如何剪取GFP基因？资料2:1970年，史密斯等人首次从大肠杆菌中提取出了一种限制性内切核酸酶。这种内切核酸酶能够识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特异性的位点上把双链DNA分子“切割”。DNA被切割后所产生的交错的切口，也就是在每条链的一端留下的单链末端，叫做黏性末端。探究限制酶的作用机理例如，EcoRⅠ限制酶的识别序列为从5’→3’方向的识别序列均为GAATTC，并切断G和A之间的位点5’3’5’3’磷酸二酯键氢键也会自动断开

问题1：如何剪取GFP基因？探究限制酶的作用机理识别双链DNA分子特定核苷酸序列断开磷酸二酯键一般为4~8个或其他数量的核苷酸，最常见的为6个核苷酸。专一性

探究限制酶的作用机理问题1：如何剪取GFP基因？5’....GGATCC....GAATTC.....AT.....AAGCTT.....AA.....GAATTC.....GATATC....3’3’....CCTAGG....CTTAAG.....TA.....TTCGAA.....TT.....CTTAAG.....CTATAG....5’BamHⅠEcoRⅠHindⅢEcoRⅠEcoRⅤ（GFP基因）荧光水母的DNA片段【思考】讨论并设计方案，选择合适的限制酶剪取GFP基因?BamHⅠ5G^GATCC3EcoRⅤ5GAT^ATC3HindⅢ5A^AGCTT3EcoRⅠ5G^AATTC3切割的基本原则：能切下基因且不破坏

探究限制酶的作用机理问题1：如何剪取GFP基因？【方案一】EcoRⅠ切割【方案一】EcoRⅤ和BamHⅠ切割3’5’5’3’3’5’5’3’3’

问题2：如何将GFP基因导入斑马鱼？资料3:科学家将GFP基因直接导入斑马鱼受精卵，利用PCR技术定时检测细胞中GFP基因的含量，结果如图。一般会直接被分解，就算可以进行转录并翻译成蛋白质、游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。

问题2：如何将GFP基因导入斑马鱼？资料4:20世纪40年代，炭疽热横行美洲。这是一种人畜共患的急性传染病，起初流行于美国德克萨斯州的鹿群，造成大批鹿群死亡。随后在人群中发现了同样的症状。科学家们发现，真凶是炭疽杆菌中的一种毒性物质。直到1950年，美国生物学家乔治才证实这种物质并非病毒，并于1952年将其命名为“质粒”。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞（如酵母菌等）细胞核或原核细胞（如细菌等）拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。能复制并带着插入的目的基因一起复制【思考】怎样保证荧光蛋白基因在斑马鱼中稳定存在并复制遗传？载体质粒动植物病毒噬菌体种类：

问题2：如何将GFP基因导入斑马鱼？载体【思考】选择哪种质粒作为GFP基因的载体呢？原因是？质粒1复制原点质粒2复制原点BglⅡEcoRⅠ【思考】怎样将目的基因准确导入质粒的细胞筛选出来?运载体需具备什么条件？同尾酶

问题2：如何将GFP基因导入斑马鱼？载体运载体需具备的条件：（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存（2）有一个至多个限制酶切点（3）有某些标记基因（4）对受体细胞无害、易分离真正被用作载体的质粒，都是在