细菌分离培养—细菌标本片的制备及染色方法（动物微生物课件）.pptx

掌握细菌常用标本片的制作及染色方法；

认识革兰氏染色的反应特性；;;;固体培养物：取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。;液体培养物：取清洁载玻片一块，将接种环在火焰上灭菌，待冷后取一滴培养液或液体，置于玻片中央，混均匀，涂成直径约为1cm的涂面。

病变组织抹片：做无菌切开，用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。;在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上方30～40cm来回微烤使其干燥。;;（二）血液推片的制作;1.取血：将血液滴在载玻片上。

;2.推片：以左手拿该片，用另一个载玻片作推片，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。;3/24/2024;;3/24/2024;3/24/2024;做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果。

固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。

每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加，以免蒸发干，影响染色效果。

每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。;细菌标本片制备及染色方法

;掌握细菌常用标本片的制作及染色方法；

认识革兰氏染色的反应特性；;;;固体培养物：取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。;液体培养物：取清洁载玻片一块，将接种环在火焰上灭菌，待冷后取一滴培养液或液体，置于玻片中央，混均匀，涂成直径约为1cm的涂面。

病变组织抹片：做无菌切开，用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。;在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上方30～40cm来回微烤使其干燥。;;（二）血液推片的制作;1.取血：将血液滴在载玻片上。

;2.推片：以左手拿该片，用另一个载玻???作推片，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。;3/24/2024;;3/24/2024;3/24/2024;（三）常用的细菌染色方法;（三）常用的细菌染色方法;（三）常用的细菌染色方法;（2）瑞氏染色法：;染色方法：细菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片上以固定标本，1～3min后，再滴加与染色液等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上，轻轻摇晃使与染色液混和均匀，5min左右水洗，干后镜检，结果菌体呈蓝色，组织细胞等物呈其他颜色。;2.复染;2.复染;革兰氏染色;涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色1min→水洗干燥→碘液媒1min→水洗干燥→95%乙醇脱脂15~20s→水洗干燥→番红复染1min→水洗干燥→镜检。;染色步骤;（1）涂片→干燥→固定;固定的目的和方法;（2）草酸铵结晶紫染色1min→水洗干燥;结晶紫初染１分钟水洗;（3）碘液媒染1min水洗→干燥;碘液媒染１分钟;（4）95%乙醇脱色15～30秒→水洗干燥;酒精脱色３０秒;（5）番红复染30S～1min→水洗干燥→镜检;番红复染３０秒;做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果。

固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。

每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加，以免蒸发干，影响染色效果。

每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。