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RNAi介导dysadherin基因沉默对胰腺癌细胞侵袭移行能力的影响的开题报告
一、研究背景
胰腺癌是世界范围内最致命的肿瘤之一，具有高度浸润性和侵袭性，迄今为止尚无有效的治疗方法。因此，寻找新的治疗靶点和探索其作用机制尤为重要。dysadherin作为肿瘤相关蛋白，参与了多种癌症的发生与发展，其中包括胰腺癌。前期的研究结果表明，dysadherin能够促进胰腺癌细胞的浸润和迁移，但其具体作用机制尚不清楚。因此，本研究旨在探讨RNAi介导dysadherin基因沉默对胰腺癌细胞侵袭移行能力的影响，以期为胰腺癌的治疗提供新的思路和方法。
二、研究目的
本研究的目的在于：1）构建携带dysadherin的胰腺癌细胞株PANC-1；2）利用RNAi技术介导dysadherin基因沉默；3）比较沉默前后PANC-1细胞的侵袭移行能力差异，并探究dysadherin参与的分子机制。
三、研究方法
1.细胞株及文化条件
选用人胰腺癌细胞株PANC-1作为研究细胞，进行培养和维护。采用RPMI1640培养基，含10%胎牛血清，1%青霉素和链霉素，37°C下5%CO2培养。
2.构建dysadherin携带的PANC-1细胞株
利用pCDNA3.1(+)-dysadherin质粒转染PANC-1细胞，筛选转染成功的克隆，并进行PCR验证。
3.RNAi介导dysadherin基因沉默
采用siRNA技术对dysadherin进行沉默。通过转染有效的siRNA，控制细胞中dysadherinmRNA的表达，找到适宜的处理时间，保证构建出高效的沉默细胞模型。
4.细胞的侵袭和迁移实验
采用Transwell和woundhealing实验，检测沉默前后PANC-1细胞的侵袭和迁移能力，并比较其差异。
5.分子机制探究
采用Westernblot、免疫荧光、RT-qPCR等技术，检测dysadherin参与的分子机制，如EGFR、Fak、PI3K/Akt等通路关键蛋白的表达变化。
四、研究意义
本研究拟探究dysadherin在胰腺癌细胞中的功能和作用机制，介导其基因沉默后，比较细胞的侵袭和迁移能力，为进一步研究胰腺癌的治疗提供新的思路和方法。同时，该研究有助于深入探究肿瘤的发生发展，丰富肿瘤生物学基础研究，为临床治疗提供参考。
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