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葡萄糖氧化酶法测定血糖含量

【目的】

1．掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验方法。

2．熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验原理。

【原理】

葡萄糖氧化酶（GA）对β-D-葡萄糖的特异性的很强。溶液中的葡萄糖有

α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖两型，二者处于动态平衡。当β-D-葡萄糖不断

受酶催化而减少时，α-D-葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D-葡萄糖

参与反应。

GA催化β-D-葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和H2O2，后者在过

氧化物酶（PA）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4-氨基安替吡啉偶联

酚”的酚氧化，并与4-氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。于

505nm与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。

【器材】

1．分光光度计

2．恒温水浴

3．微量加样器

4．刻度吸量管

5．中号试管

【试剂】

1．0.01mol/LpH7.0磷酸盐缓冲液

无水Na2HPO418.5g和KH2PO45.3g溶于800ml蒸馏水中，用少量1mol/L

的NaOH或HCl调pH至7.0，再加蒸馏水稀释至1L。

2．酶试剂

取GA1200单位、PA1200单位，4-氨基安替吡啉10mg、叠氮钠100mg，

加上述磷酸盐缓冲液至80ml左右，调pH至7.0，再加同上缓冲液至100ml，

混匀。冰箱内保存可稳定3个月。

3．酚试剂

酚100mg溶于100ml蒸馏水中。因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成50g

/dl，贮棕色瓶中，用前稀释。

4．酶-酚混合试剂

将试剂2、3等量混合。冰箱内保存可稳定1个月。

5．葡萄糖标准贮存液（20mg/ml）

无水D-葡萄糖于80℃烤箱内干燥恒重，冷却后，称取2.0g以0.25%苯甲

酸溶解、稀释定容至100ml。

6．葡萄糖应用标准液（100mg/dl）

取葡萄糖标准液5ml，加0.25%苯甲酸溶液稀释定容至100ml。

7．蛋白沉淀剂

溶解Na2HPO410g、Na2WO410g、NaCl19g于800ml蒸馏水中，加

入1mol/LHCl125ml，加蒸馏水至1000ml混匀。

【操作】

1．血浆直接测定

取试管3只，标明测定、标准、空白，分别加入血清20μl，磷酸盐缓冲液

20μl，然后各管均加酶-酚混合剂各3ml，混匀后将3管同时置37℃水

浴保温15min，到时取出冷却。用505nm波长，以空白管调整零，读取各管

吸光度值。

2．全血去蛋白血滤液测定

取蛋白沉淀剂1ml加全血50μl混匀，放置7分钟后，离心取上清0.5ml于

测定管内；取蛋白沉淀剂1ml加葡萄糖应用标准液50μl，混匀后从中取

0.5ml于标准管内；另取蛋白沉淀剂0.5ml于空白管内。以上三管各加酶-酚

混合试剂3ml，各管分别混匀同时放入37℃水恒温箱浴保温15min后，取

出如前比色测定。

【计算】

血糖浓度（mg/dl）＝

血糖浓度(mmol/L)＝

【注意事项】

1．葡萄糖氧化酶法测糖，色原性氧受体种类