《食品微生物检验技术》课件——生化制剂的制备.pptVIP

04毒性酶类试验2．血浆凝固酶试验（2）试验方法以试管法为主。即找灭菌小试管3支，向三个试管中各加入1:1体积的血浆－无菌水0.5mL，1支加入被检菌株的营养肉汤培养液0.5mL；其余2支作对照管，其中一支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液0.5mL作阳性对照；另一支加入0.9％氯化钠溶液0.5mL作空白对照。将3个试管同时放在37℃恒温箱或水浴中培养，每0.5h观察一次，4h内无凝固现象者，观察直至24小时。04毒性酶类试验2．血浆凝固酶试验（3）试管法的结果观察与记录空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血浆凝固。若试验管血浆凝固，则为阳性；如果三管均无凝固现象，即为阴性。本试验法所用到的试剂和培养基在血清学反应里介绍过，此处不再赘述。感谢您的聆听THANKYOUFORLISTENING*************************生化试剂制备目录/Contents1糖（醇）类代谢试验法生化试剂制备氨基酸和蛋白质代谢试验法2呼吸酶类试验3毒性酶类试验401糖（醇）类代谢试验法（1）试验原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇，有的只能分解1-2种糖醇，有的分解糖醇只产酸不产气，有的分解糖醇能产酸产气，通过这些特点，我们可以鉴别细菌。01糖（醇）类代谢试验法糖发酵培养基主要有：液体糖发酵管、半固体糖发酵管、固体糖发酵管、双糖(或三糖)高层斜面发酵管四类。01糖（醇）类代谢试验法糖发酵试验法的具体操作方法：采用无菌操作法，首先将已分离培养的纯种细菌用接种针或者接种环移取，然后接种在糖发酵管中，如果是半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。最后放置于36±1℃温箱内培养，经过一定时间（数小时以至二周之间）的培养，培养过程中每天观察结果，并与指示剂比对即可。01糖（醇）类代谢试验法（3）葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）的制备称取蛋白胨2.7克，氯化钠5.0克，0.2%溴麝香酚兰0.03克，琼脂3克，0.3克KH2PO4，葡萄糖10.0克，水1000毫升。加热溶解，121℃高压灭菌20min即可。01糖（醇）类代谢试验法（2）V-P.试验的试验方法首先取3支葡萄糖蛋白胨水培养基，将它们一一编号，第1号接种大肠杆菌，第2号接产气杆菌，第3支接未知菌；然后放入37℃培养箱中培养48h，之后加入40%KOH5-10滴，再加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振荡；最后放入37℃温箱中保温30min，以加快反应速度；保温期间注意观察培养基的颜色变化：①当发酵管出现红色者时，称为阳性，记作V-P+②当发酵管为黄色或铜绿色时，称为阴性，记作V-P-。01糖（醇）类代谢试验法（2）V-P.试验的制备方法制备方法：将3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯化钠MR-VP培养基，36℃士1℃培养48h。取1mL培养物转放到一个试管内，加0.6mL甲液，摇动。加0.2mL乙液，摇动。随意加一点肌酸结晶，4h后观察结果。阳性结果是呈伊红的粉红色。01糖（醇）类代谢试验法3．甲基红（MR）试验（1）试验原理肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基pH值下降至pH=4.5以下，使甲基红指示剂变红，即为甲基红试验阳性；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，示为甲基红试验阴性。简而言之，甲基红试验原理就是检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。01糖（醇）类代谢试验法（2）试验方法首先挑取少许新鲜的待测试验培养物，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基中；然后放于36±1℃或30℃（以30℃较好）培养箱中培养3~5天；其中注意，从培养的第48h起，每天要取培养液1mL，加入甲基红指示剂1~2滴，立即观察结果。01糖（醇）类代谢试验法（3）结果观察与记录①呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为弱阳性，记MR+；②呈橘黄色或黄色为阴性，记MR-。从发现阴性并培养至第5天仍为阴性，即可判定结果。（4）试验中所用培养基和试剂的制备①磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基的制备称取蛋白胨5g，葡糖糖5g，磷酸氢二钾2g，加入蒸馏水1000mL，充分溶解后调pH7.0-7.2，过滤。分装于试管中，每管10mL，121℃灭菌30min。01糖（醇）类代谢试验法②甲基红试剂称取甲基红（Methylred）0.04g，溶于60mL的