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生物化学与分子生物学的知识点

生物化学与分子生物学的精髓

一、蛋白质的奥秘

1.凯氏定氮法：体内氮元素主要存在于蛋白质中，其含氮量平均约为16%。通过测定生物样本的含氮量，可估算蛋白质含量：

蛋白质含量（g%）=每克样本含氮克数×6.25×100

2.蛋白质的生物学重要性：广泛分布、种类繁多、含量丰富、功能多样。

3.人体蛋白质由20种L-α-氨基酸构成（甘氨酸除外）。硒代半胱氨酸在特定情况下亦可参与蛋白质合成。

4.20种L-α-氨基酸根据其侧链性质分为：非极性脂肪族、极性中性、芳香族、酸性、碱性氨基酸。

5.脯氨酸为α-亚氨基酸，其氨基上的氢原子被自身侧链取代。

6.必需氨基酸包括：甲硫氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸；条件必需氨基酸：半胱氨酸、酪氨酸；儿童必需氨基酸：精氨酸、组氨酸。

7.在特定pH下，氨基酸的阳离子和阴离子解离趋势相等，呈电中性，此pH即为等电点（pI）。

8.酸性氨基酸的等电点取两羧基pK值的平均值；碱性氨基酸的等电点取两氨基pK值的平均值。

9.色氨酸、酪氨酸的共轭双键在280nm处有最大吸收峰，常用于蛋白质含量的快速测定。

10.氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物，可用于氨基酸的定量分析。

11.蛋白质的主链骨架由N（氨基氮）、Cα（α-碳原子）和CO（羧基碳）构成。

12.肽键的6个原子构成肽单元，呈反式构型。

13.α-螺旋为右手螺旋，每3.6个氨基酸残基上升一圈，螺距约0.54nm。

14.β-折叠呈折纸状，氨基酸残基侧链位于锯齿状结构的上下方。

15.β-转角常出现在肽链的180°回折处，第一个残基的C=O与第四个残基的N—H形成氢键。

16.模体是由两个或多个具有二级结构的肽段在空间上相互接近形成的规则二级结构组合。

17.锌指是一种常见的模体，由1个α-螺旋和2个反向平行的β-折叠组成。

18.结构域是分子量较大的蛋白质中的紧密且稳定的区域，具有独立的空间构象和生物学功能。

19.分子伴侣辅助合成中的蛋白质折叠成正确的空间构象。

20.蛋白质亚基是具有完整三级结构的多肽链，单一亚基通常无生物学功能。

21.蛋白质按组成分为单纯蛋白质和结合蛋白质；按形状分为纤维状蛋白质和球状蛋白质。

22.蛋白质家族是由氨基酸序列相似、空间结构与功能相近的蛋白质组成。

23.蛋白质超家族包含氨基酸序列相似性不高，但含有相似作用模体结构的蛋白质家族。

24.蛋白质一级结构是高级结构和功能的基础，决定了蛋白质的空间构象、功能和进化信息。

25.蛋白质的功能依赖于特定的空间结构，构象变化可影响功能甚至导致疾病。

26.协同效应是指一个亚基与配体结合后，影响其他亚基与配体结合能力的现象。

27.别构效应是指寡聚蛋白与配体结合后，改变蛋白质构象，导致生物活性变化的现象。

28.蛋白质的等电点是指蛋白质解离成正、负离子趋势相等的pH。

29.表面电荷和水化膜是维持蛋白质胶体稳定性的因素。

30.蛋白质变性是指在物理和化学因素作用下，蛋白质特定空间构象被破坏，导致理化性质和生物活性丧失。

31.蛋白质复性是指去除变性因素后，蛋白质可恢复或部分恢复原有构象和功能。

32.蛋白质沉淀是指消除蛋白质溶液中的稳定因素后，蛋白质疏水侧链暴露，肽链相互缠绕聚集，从溶液中析出。

33.蛋白质凝固作用是指蛋白质变性后的絮状物加热变成坚固的凝块。

34.蛋白质在280nm波长处有特征性吸收峰，可用于定量分析。

35.双缩脲反应是指蛋白质和多肽分子中的肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色。

36.盐析是通过加入硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等破坏蛋白质表面电荷和水化膜，导致蛋白质沉淀。

37.丙酮（乙醇）沉淀蛋白质需在0～4℃低温下进行，沉淀后应立即分离。

38.免疫沉淀法利用特异抗体识别抗原蛋白，从蛋白质混合溶液中分离抗原蛋白。

39.透析是利用透析袋将大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。

40.超滤法是利用正压或离心力使蛋白质溶液通过超滤膜，达到浓缩目的。

41.电泳是通过蛋白质在电场中的泳动，分离各种蛋白质的技术。

42.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳通过SDS覆盖蛋白质，消除电荷差异，根据颗粒大小分离蛋白质。

43.等电聚焦电泳利用线性pH梯度，使蛋白质泳动到其等电点pH区域，净电荷为零而停止移动。

44.双向电泳先进行等电聚焦电泳，再进行SDS，得到二维分布的蛋白质图。

二、核酸的结构与功能

1.脱氧核糖核酸（DNA）的结构层次：脱氧核糖→核酸→DNA双螺旋→超螺旋→染色质→染色体。

2.核糖的C-1原子与嘌呤的N-9或嘧啶的N-1原子形成β-N-糖苷键，核糖与碱基呈反式构象。

3.核苷C-5原