(2.8)--蔗糖酶抑制剂和激活剂系列实验.ppt

蔗糖酶抑制剂和激活剂探究实验

实验流程和内容4基本原理：概念介绍和分类1酶促动力学特征2我们的实验目的3参考文献5CONTENTS目录

酶抑制剂和激活剂 酶分子与配体结合后，可以改变酶的活性。使酶活性降低乃至完全丧失活性的配体，称为酶的抑制剂；能启动和（或）增强酶的活性的配体，称为酶的激活剂，研究酶的抑制和激活作用，有很大的实用价值。其中酶抑制剂分为1.不可逆抑制剂：抑制剂与酶活性中心共价结合，不可逆，抑制剂难以用稀释透析等方法除去以恢复酶活性。 a.专一性不可逆抑制剂：只与活性部位的基团反应，与其它基团不反应 b.非专一性不可逆抑制剂：与酶分子中一类或几类基团作用，不论是必需基团与否， 皆可共价结合，由于其中必需基团也被抑制剂结合，从而导致酶的失活2.可逆抑制剂：和酶活性中心非共价结合而结合可逆，可以用稀释、透析法恢复活性。（本实验抑制剂部分重点） a.竞争性抑制剂：抑制剂与底物竞争集合酶反应中心 b.非竞争性抑制剂：酶与抑制剂结合后还能和底物结合，但活性降低c.反竞争性抑制剂：酶只有与底物结合后才能和抑制剂结合 d.混合型抑制：含有至少两种以上种类抑制剂的混合物（由于时间和原料等问题 ，本实验不做混合型抑制剂相关实验）

酶动力学特征可逆抑制剂和不可逆抑制剂

Vm不变，Km变大Vm和Km缩小相同倍数Vm变小，Km不变

实验目的1.探究和验证实验所选取物质中哪些是酵母蔗糖酶的抑制剂，哪些是酵母蔗糖酶的激活剂。2.探究上一步中检测为抑制剂的物质是可逆抑制剂还是不可逆抑制剂3.探究上一步中得到的可逆抑制剂竞争性抑制还是非竞争性抑制剂还是反竞争性抑制剂。4.找到每种抑制剂/激活剂既经济，效果又好的大致浓度5.通过浓度变化探究各物质中是否有随浓度变化而转变抑制和激活效果的物质（如低浓度激活，高浓度抑制或是低浓度抑制，高浓度激活）

实验流程及内容 通过文献查阅，我们确定了抑制剂阿卡波糖、缬氨霉素、焦磷酸钠和激活剂硫酸镁、维生素C、EDTA（乙二胺四乙酸）进行实验1.制定葡萄糖标准曲线（之前课上已完成）以A520值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，制作葡萄糖标准曲线。

2.预实验确定蔗糖酶液稀释度，取酵母蔗糖酶样品IV分别做三个稀释度，如：1:10、1:20、1:30，按6号管步骤操作，取A520nm值为0.6-0.8的酶稀释度进行后续实验。

3.判断抑制剂可逆性：（以酶浓度为变量）阿卡波糖米格列醇实验

焦磷酸钠取76mg/ml根据实验结果作v-[E]图判断焦磷酸钠、阿卡波糖、缬氨霉素是否是可逆抑制剂焦磷酸钠实验

4.判断可逆抑制剂的竞争类型（以底物浓度为变量）阿卡波糖米格列醇实验

根据实验结果换算，对米氏方程双倒数作图并观察Vm和Km的变化，判断可逆抑制剂的竞争类型。焦磷酸钠实验

5.抑制剂抑制效果测定（以抑制剂浓度为变量）阿卡波糖米格列醇实验

把某一组的产物减少量除以上一组的产物量称作抑制效果，以抑制剂量为横坐标，抑制效果为纵坐标作图，观察分析并找到每种抑制剂的最佳浓度。

6.不同类型激活剂的激活效果测定：（以激活剂浓度为变量）Mg2+实验

EDTA实验

维生素C实验根据光电比色结果确定这几种激活剂的激活效果与浓度的关系。同时观察是否存在随浓度增加而变为抑制的现象。

参考文献1.LiWT,ChuangYH,HsiehJF.CharacterizationofMaltaseandSucraseInhibitoryConstituentsfromRhodiolacrenulata.Foods.2019Nov2;8(11):540.doi:10.3390/foods8110540.PMID:PMCID:PMC6915683.2.AbdelhadyMI,ShaheenU,BaderA,YounsMA.ANewSucraseEnzymeInhibitorfromAzadirachtaindica.PharmacognMag.2016May;12(Suppl3):S293-6.doi:10.4103/0973-1296.185705.PMID:PMCID:PMC4971946.3.RobertRoskoski,ModulationofEnzymeActivity,TheComprehensivePharmacologyReference,Elsevier,2007,ISBN9780080552323.4、LiGang.2021.RecentAdvancesinc-JunN-TerminalKinase(JNK)Inhibitors.CURRENTME