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φC31整合酶介导的外源基因在牛基因组中整合位点的分析与应用的开题报告
摘要:
φC31整合酶是一种来源于Streptomyces嗜热菌的嗜热酶,可以介导外源基因在哺乳动物基因组中的基于单一整合位点的稳定整合和高效表达。本研究旨在分析φC31整合酶介导的外源基因在牛基因组中整合位点的特点及其应用潜力。首先,利用φC31整合酶介导EGFP插入牛基因组中,选定2个整合位点进行分析,结果显示插入位点稳定且对基因表达无明显影响;其次,对φC31整合酶表达量和高温热激筛选条件进行优化,发现温度为42℃,培养6小时时φC31整合酶的表达量最高;最后,利用φC31整合酶介导的外源基因在牛基因组中的稳定整合,构建了一种带有功能性基因的转基因牛系。该研究为利用φC31整合酶介导外源基因在牛基因组中的稳定整合提供了一定的理论和实践基础。
关键词:φC31整合酶,转基因,整合位点,稳定整合。
Abstract:
φC31integraseisathermostableenzymeoriginatingfromStreptomyces,whichcanmediatethestableandefficientexpressionofexogenousgenesinmammaliangenomesbasedonasingleintegrationsite.ThisstudyaimstoanalyzethecharacteristicsoftheintegrationsiteofexogenousgenesmediatedbyφC31integraseinthebovinegenomeanditspotentialapplications.First,EGFPwasinsertedintothebovinegenomeusingφC31integrase,andtwointegrationsiteswereselectedforanalysis.Theresultsshowedthattheinsertionsitewasstableandhadnoobviouseffectongeneexpression.Secondly,theexpressionlevelofφC31integraseandthescreeningconditionsofhigh-temperatureheatwereoptimized.ItwasfoundthattheexpressionlevelofφC31integrasewasthehighestat42℃and6hoursofcultivation.Finally,atransgenicbovinelinewithafunctionalgenewasconstructedbystableintegrationofexogenousgenesmediatedbyφC31integraseinthebovinegenome.ThisstudyprovidesatheoreticalandpracticalbasisforthestableintegrationofexogenousgenesinthebovinegenomemediatedbyφC31integrase.
Keywords:φC31integrase,transgenic,integrationsite,stableintegration.
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