DNA序列测定的应用与发展.pptxVIP

生命基地091;DNA序列测定的应用？

分析基因组核苷酸排列序列

分析基因序列

基因定点诱变的基础

基因工程载体构建中DNA序列定位和排序的基础

确定DNA序列中蛋白质的编码区;测序技术的最近发展

1.商品化测序试剂盒解决了质粒问题，节约了时间，但缺乏灵活性。

2.自动化测序仪以酶学测序反应或放标测序产物为基础，微机处理。

3.热循环测序使极少数测序产物线性放大。

4.测序商品化60--180￥，搞定;思考题;;;;;;;3.化学降解法测序的基本原理是什么？如何提高其测序精确度？

基本原理：

用放射性核素标记待测DNA一侧末端

将标记DNA分为G、A+G、C+T、C四个反应体系

用不同的化学试剂处理不同的反应体系，随机断裂DNA片段某种碱基中的任何一个，产生一组一端为放射性标记的末端，另一端为不同大小的DNA片段的混合物

电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出DNA序列;;4.双脱氧链终止法测序的主要试剂有哪些？

①引物：通常由20-23个碱基构成，G+C=12，A+T=8到11，Tm=60-68℃，避免形成引物二聚体或形成发卡样结构

②模板

③DNA聚合酶

④2′，3′-双脱氧核苷三磷酸

（2′,3′-dideoxynucleosidetriphosphate,ddNTP）

⑤放射性标记dNTP;;;