鹿血肽的制备工艺.pptxVIP

鹿血肽的制备工艺22020-xx-xx-目录前言鹿血肽的制备工艺2鹿血肽的制备工艺前言1前言目前生物活性肽的制备方法有很多，如酶解法、发酵法、酸水解、碱水解、凝胶色谱法、超滤法、反向液相色谱法等。其中酶解法成本低，且所得生物活性肽不含化学成分，毒性危害小1、酶解法的简介酶解提取法是利用单种或多种特异性蛋白酶或非特异性蛋白酶酶解蛋白,获得小分子活性肽酶解法制备生物活性肽的关键在于蛋白酶种类的选择和酶解条件的选择蛋白酶对底物具有一定特异性,不同蛋白酶酶切位点也不同,催化水解同一蛋白片段将会得到不同大小的肽段因此,一些研究采用的策略是在最佳pH和温度条件下,选用不同蛋白酶对底物进行水解,比较产生的各水解产物的水解度、产率及生物活性前言针对每种蛋白质底物和每种选择的酶或酶组合来优化关键水解工艺参数(酶解温度、pH、溶液介质等),并且必须在蛋白水解期间维持参数以确保肽的有效释放前言在实际应用中,往往采用2种或2种以上复合蛋白酶同时作用于底物蛋白,不仅可以提高酶解效率,而且可以降低苦味肽的产生，这是由于苦味肽的形成与蛋白质水解过程中疏水性氨基酸的暴露有关,而游离氨基酸苦味与苦味肽相比不明显,复合酶解法可采用外切蛋白酶(氨肽酶、羧肽酶)作用于底物蛋白,将利于水解产物生成游离氨基酸,外切酶切除末端疏水性氨基酸,可使苦味减弱2、酶解提取法的提取步骤通常包括以下几个方面第一步是样品预处理，包括去除杂质、调整pH值、加入缓冲液等。这些操作有助于提高酶解效率和选择性第二步是酶的选择和添加。不同的生物大分子材料需要不同的酶进行酶解，因此需要根据具体的情况选择相应的酶。酶的添加量和酶解时间也需要根据实际情况进行调整前言第三步是酶解反应的停止。酶解反应的停止，通过加入酶抑制剂、改变pH值、加热等方式进行第四步是纯化和分离。酶解产物通常需要进行纯化和分离，以获得高纯度的生物大分子材料。常用的纯化和分离方法包括离心、过滤、层析等这种技术具有高效、灵敏、选择性强等特点，被广泛应用于医学、生物技术、食品工业等领域三、酶解法制备鹿血肽参考文献：A前言文献名称：酶解法制备鹿血生物活性肽的工艺研究作者：高倩倩,付慧,李红莹,王英臣期刊：粮食与油脂摘要:以鹿血为原料，采用超声波破碎法制备血红蛋白粉，然后对其进行酶解制备鹿血生物活性肽。在筛选出最适蛋白酶的基础上，以DPPH自由基的清除率为指标，通过单因素试验结合响应面法优化鹿血生物活性肽的酶解法制备工艺。结果表明：最适蛋白酶为木瓜蛋白酶；最佳制备工艺为酶解温度58℃、酶解时间4h、酶添加量7.3%(以血红蛋白粉质量计)、pH10.2,在此条件下，鹿血生物活性肽对DPPH自由基的清除率最大，为75.96%前言材料：鹿血，葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠、水合茚三酮、无水乙醇、盐酸，分析纯;木瓜蛋白酶(20万U/g)、碱性蛋白酶(24万U/g)、中性蛋白酶(4万U/g)、胃蛋白酶(5万U/g)，DPPH标准品实验过程：鹿血生物活性肽粗提液制备及最适蛋白酶的确定用蒸馏水配制10mg/mL鹿血血红蛋白粉悬浮液4份，分别将最适条件下(碱性蛋白酶pH8.5、温度55℃、中性蛋白酶pH7.0、温度40℃、木瓜蛋白酶pH6.5、温度50℃;胃蛋白酶pH2.0、温度37℃)体积分数为5%的4种蛋白酶加入到悬浮液中，于水浴摇床中以100r/min水解5h。期间每隔1h测定pH1次，分别用1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液维持4种酶反应在其最适pH内反应结束后于100℃水浴加热10min，然后将反应液用除菌过滤器经0.45μm滤膜过滤，得鹿血生物活性肽粗提液，于4℃保存备用。通过测定各生物活性肽粗提液对DPPH自由基的清除率，确定最适蛋白酶前言鹿血生物活性肽制备

用筛选出的最适蛋白酶对鹿血生物活性肽粗提液进行酶解，结束后将酶解产物在90℃条件下水浴灭酶8min，冷却至20℃左右进行分离操作，酶解液用透析膜分离，即可得到鹿血生物活性肽

酶解法制备鹿血生物活性肽的优化试验

单因素试验

在酶解温度58℃、酶解时间4h、酶添加量7%、pH10的固定条件下进行单因素试验、分别研究酶解温度、酶解时间、酶添加量、pH对DPPH自由基清除率的影响

参考文献B

文献名称：鹿血多肽的制备工艺及抗氧化能力研究

作者：胡太超,陶荣珊,李庆杰,张晶,苏凤艳,王艳梅,王全凯前言1期刊：食品工业科技摘要:以新鲜鹿血为原料,利用胰蛋白酶水解制备鹿血多肽,以水解度为指标,在单因素和正交实验的基础上,确定酶解的最佳工艺条件,即加酶量为6%,pH为9,反应温度为37℃,反应时间为