植物总蛋白的提取.pptVIP

一、实验目的：掌握植物总蛋白提取的原理了解蛋白提取操作过程二、实验原理蛋白质存在于生物体的组织细胞中，在分离纯化之前必须采用适当方法使蛋白质以溶解状态释放出来。通常是先将生物组织进行机械破碎。由于一般的机械方法不能破坏细胞，因此还需要进一步将细胞破碎，根据细胞的结构特点，可以选择不同的方法进行破碎，常用的方法有研磨法，超声波法，冻融法和酶解法等。样品经细胞破碎后，各种蛋白质被释放出来。根据不同蛋白质的特性，选择不同的溶剂进行抽提：例如：水溶性蛋白质可以用中性缓冲溶液抽提，酸性蛋白质用稀碱性溶液抽提脂溶性蛋白则可用有机溶剂抽提等得到的粗抽提物，经离心除去固体杂质后，在通过盐析，等电点沉淀或有机溶剂沉淀等方法处理，即得到蛋白质粗产品。三、材料

转基因烟草四、设备

移液器，冷冻高速离心机，低温冰箱，台式高速离心机，1.5ml离心管。五、试剂蛋白质提取液：300ml1、1MTris-HCl（PH8.0）?45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g4、0.07%的β-巯基乙醇Tris-HCl：构建平衡缓冲体系，保证溶液一定的pH值；β-巯基乙醇：a、使多酚氧化酶失活，防止酚类氧化；b、使目的蛋白变性可溶；TritonX-100：可增大蛋白的可溶性；PVP：吸附色素及可防止蛋白氧化，若材料易被氧化或色素含量高可适当多加；PMSF：抑制蛋白酶，防止蛋白降解。