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现代色谱分析

1、色谱流出曲线图能说明哪些问题?

①根据色谱峰的个数，可判断样品中所含组分的最少个数。

②根据色谱峰的保留值（峰位），可进行定性分析。

③根据色谱峰的面积或峰高，可进行定量分析。

④色谱峰的区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据。

⑤色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。

2.根据VanDeemter议程式,HPLC提高柱效的方法有哪些?或HPLC法降低板高

的主要途径有哪些？

①采用粒径小、窄粒度分布的球形固定相，首选化学键合相，用匀浆法装柱。

②采用低粘度流动相，低流速（1mL／min）

③柱温一般以25~30℃为宜。太低，则使流动相的黏度增加，温度高易产生气泡。用不

含有机溶剂的水溶液为流动相的色谱法（如IEC、IC）可按需升温。

3.什么是正相色谱?什么是反相色谱?HPLC常用反相色谱,它最常用的固定相和

流动相是什么?各适用于分离哪些化合物？

①正相色谱：流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法。

反相色谱：流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法。

②反相固定相：C18、C8流动相：甲醇、乙腈、水

③适用于分离非极性和极性较弱的化合物。

4.一个好的检测器应具备什么条件?HPLC中可使用的检测器有哪些?你在实验中用过哪些

检测器,它们有何特点(包括使用中应注意的问题,适用于何种物质的检测)?属于哪种类型?

灵敏度高、噪音低、线性范围宽、重复性好、适用化合物的种类广泛等性能。

HPLC中可使用的检测器:紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射

检测器、化学发光检测器。

紫外检测器特点：①灵敏度高，噪声低。②不破坏样品，能与其他检测器串联，

可用于制备色谱。③对温度及流动相流速波动不敏感，可用于梯度淋洗。④属浓

度型检测器。

紫外检测器的应用范围：主要用于检测具有π-π或p-π共轭结构的化合物。

如芳烃与稠环芳烃、芳香基取代物、芳香氨基酸、核酸、甾体激素、羧酸与羰基

化合物等。

5.流动相和分析液都不能有气泡,为什么?常用的除气方法有哪些?流动相和分析液都不能

有不溶物,为什么?如何处理?

⑴因为溶解在溶剂中的气体会在管道、输液泵或检测池中以气泡形式逸出，影响

正常操作的进行。

①溶剂中的CO2使得电导检测器的背景增大。

②检测池中的气泡，使得信号不稳定，常出现系列假峰（特别是当柱子加温使用

时）。

③色谱柱内的气泡，使柱效降低。

④输液泵内的气泡，使活塞动作不稳定，流量变动，严重时无法输液。

脱气方法：用惰性气相（如氦气）驱除溶剂中的气体；加热回流；真空脱气和超

声波脱气。

⑵不溶物会堵塞色谱柱。使用前用0.45um孔径的滤膜过滤。

6．HPLC对流动相有哪些要求？

①不与固定相发生化学反应

②对试样有适宜的溶解度,使k在1-10范围内

③与检测器相适应

④黏度小

⑤纯度高，无机械杂质

⑥使用前需脱气

7ODS是什么?如何制成的，有何特点?

ODS是指十八烷基。

将十八烷基氯硅烷试剂与硅胶表面的硅醇基，经多步反应生成ODS键合相。

特点：有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应

能力。

8用ODS柱分析试样中两种弱酸性物质(pKa可能在2-5范围内),以一定比例的甲醇-水或乙

腈-水为流动相时,保留时间短,分离度差,应如何改变流动相以改善分离度？

答：首先增加水含量，以延长保留时间，提高分离度，如果效果不好，可采用离子抑制色谱

法。用醋酸（盐）或磷酸（盐）等缓冲液，使流动相pH降低至3，如果还不能使保留时间

延长，说明酸度较强（pKa3），则可采用离子对色谱法，用四丁基胺磷酸盐等作离子对试

剂，在较高pH下（如pH5-7）进行分离。

9简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。

相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测

主要差别：分析对象的差别和流动相的差别

分析对象

GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，

高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及

高聚物的样品不可检测

占有机物的20%

HPLC：溶解后能制成溶液的样品，

不受样品挥发性和热稳定性的限制

分子量大、难气化、热稳定性