植物多倍体诱导及其细胞学鉴定PPT课件.pptx

实验四＿＿＿植物多倍体诱导及其细胞学鉴定一、实验目的1．了解人工诱发多倍体植物的原理；2．掌握用秋水仙素诱导多倍体植物的方法；3.利用染色体分析方法对多倍体植物进行细胞学鉴定。二、实验原理（一）染色体组染色体组：一个正常配子中所含的全套染色体称为染色体组。也称基因组，指一个正常配子中带有的全部基因及DNA序列。（二）多倍体植物X：基数，指一个染色体组内含有的染色体数目。n：配子中的染色体数目。玉米：2n=2X=20，X=10，n=10，n=X；普通小麦：2n=6X=42，X=7，n=21，n=3X可见：n既可以等于X，也可以是X的倍数。染色体倍性一倍体(monoploid)：体细胞中只具有一个染色体组的个体。二倍体(diploid)：体细胞中具有两个染色体组的个体。自然界中多数物种属于二倍体。多倍体(polyploid)：体细胞中具有两个以上染色体组的个体。如三倍体(3X)，四倍体(4X)等。（三）诱发多倍体植物的意义（四）诱发植物多倍体的方法及原理物理方法：温度、机械损伤、射线等。化学方法：用秋水仙素溶液处理植物的种子或幼苗，是常用的人工诱导多倍体的有效方法。秋水仙素是从百合科秋水仙属植物秋水仙(Colchicum?autumnale)的种子及器官中提取出来的一种生物碱，其分子式为C22H25NO6，因有剧毒，故使用时要特别注意，切勿使药液进入眼内或口中。秋水仙素诱导作用在于阻止有丝分裂细胞中纺锤丝的形成，而对染色体的结构和复制无显著影响。若浓度适合，药剂在细胞中扩散后，不致发生严重的毒害，这样纵列为二的染色体不能向两极分开，因而便产生了染色体加倍的重组核。当药剂的作用消除后，由于多倍体细胞继续分裂，便得到多倍体组织，以后则产生新的多倍体植株。（五）多倍体的鉴定直接鉴定：将经过秋水仙素溶液处理的根尖、茎尖进行染色体计数，多倍体植株的染色体是加倍的。间接鉴定：根据多倍体植株外部形态变化的主要特征是巨大性这一点提出的。花粉粒和气孔的增大常作为染色体数目加倍的辅助性指标。三、实验材料蚕豆种子(2n=12)四、实验器具和药品实验器具：生化培养箱、冰箱、水浴锅、天平、显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、滤纸药品：0.4%秋水仙素、70%酒精、甲醇、冰醋酸、盐酸、改良苯酚品红染色液五、实验步骤１．浸种催芽：将蚕豆种子放入盛有蒸馏水的烧杯中，25℃浸泡24h，此间至少换水两次（水25℃预温）。种子吸胀后，用纱布松散包裹置于白磁盘中，保持湿度，在25℃温箱中催芽12－24h，待初生根长出2－3mm时，再取发芽良好的种子，放入铺满滤纸的培养皿中，25℃继续催芽，经约36－48h，大部分初生根长至1－2cm左右，根毛发育良好，即可用来进行处理。２．处理选取初生根尖生长良好、根长一致的种子，放入培养皿，用0.4%秋水仙素溶液浸泡根尖。处理时间约为72h，根尖明显膨大时切下。同时，取另一培养皿以蒸馏水处理根尖，作为阴性对照。３．根尖细胞恢复培养将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2－3min。将洗净的种子再放入铺好滤纸的白磁盘内25℃温箱中恢复培养22－24h。４．固定将恢复后的种子从根尖顶端切下1cm长的幼根放入广口瓶中，以卡诺氏固定液(Carnoy‘sFluid)（冰醋酸：乙醇=1:3）进行固定2-24h后，保存于70%乙醇溶液中,4℃冰箱保存。5.切取分生组织蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，吸水纸吸净蒸馏水，置于载玻片上，切取乳白色分生组织1mm左右。6.解离滴入1mol/L盐酸浸没分生组织，室温下解离8-15min。7.水洗吸去盐酸，蒸馏水浸洗分生组织3-5次。8.染色、压片加少量改良苯酚品红染液，染色20-30min;加盖玻片，压片。9.镜检将玻片标本放在显微镜的低倍镜下观察，找到分生组织区细胞分散良好、核膨大、分裂相多的部分转到高倍镜下进行观察。10.观察多倍体细胞染色体的形态并统计其染色体数目。六、实验结果与分析1.统计100个中期细胞，计算多倍体细胞的出现率；2.绘制观察到的蚕豆二倍体、多倍体的中期分裂相图。注意事项秋水仙素处理时间应根据供试材料的细胞周期而定，当处理时间介于供试材料细胞周期的一倍到两倍之间时，可观察到细胞由二倍体变为四倍体，当处理时间多于供试材料细胞周期的两倍以上时，供试材料的细胞可从四倍体变为八倍体。因此，在培养多倍体细胞时，应注意用秋水仙素的处理时间；此外，秋水仙素的浓度对处理效果也有影响，应注意掌握。（蚕豆根尖在19℃条件下，一个细胞周期约为19.3小时）多倍体细胞中染色体的形态有两种，一种为一条染色体含有一条单体，另一种为一条染色体含有两条单体，应注意观察，并思考其形成原因。秋水仙素为剧毒药品