生物工程下游技术复习题.docx

生物工程下游技术复习题第一章绪论

生物下游加工过程的几个阶段

预处理和固液分别,提取〔初步分别〕,精制〔高度纯化〕,成品制作.评价分别效果的重要参数:纯度，回收率，浓缩率。

其次章发酵液预处理和固液分别

其次章发酵液预处理和固液分别

主要名词：分散、絮凝

分散：指在电解质作用下，由于胶粒之间双电层电排斥作用降低，电位下降，而使胶体体系

不稳定的现象；

絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶粒形成较大絮凝团的过程。

转变发酵液过滤特性的方法

调酸〔等电点〕，热处理，电解质处理，添加分散剂，添加外表活性物质，添加反响剂冷冻-解冻，添加助滤剂

发酵液的相对纯化

高价无机离子的去除方法

杂蛋白的去除方法

沉淀法，变性法，吸附法。

3常用的固液分别方法：

重力沉降，浮选，旋液分别，介质过滤，离心。

离心

离心机种类：碟片式。管式。倾析式。

过滤〔澄清过滤，滤饼过滤〕

过滤机种类：按推动力分为4种重力过滤，加压过滤，真空过滤，离心过滤。板框压滤机，真空转鼓过滤机

第三章细胞裂开和包涵体复性

细胞裂开的主要方法和适用对象，了解根本机理

方法：珠磨法原理：进入珠磨机的细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英砂、氧化铝等研磨剂

〔直径小于1mm〕一起快速搅拌或研磨，研磨剂、珠子与细胞之间的相互剪切、碰撞，使细胞裂开，释放出内含物。在珠液分别器的帮助下，珠子被滞留在裂开室内，浆液流出从而实现连续操作。

高压匀浆法原理：利用高压使细胞悬浮液通过针形阀，由于突然减压和高速冲击撞击环使细胞裂开，细胞悬浮液自高压室针形阀喷出时，每秒速度高达几百米，高速喷出的浆液又射到静止的撞击环上，被迫转变方向从出口管流出。不适用范围：易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性菌，含有包含体的基因工程菌〔因包含体坚硬，易损伤匀浆阀〕

珠磨法固体剪切作用液分别困难

可达较高裂开率，可较大规模操作，大分子目的产物易失活，浆

高压匀浆法液体剪切作用性菌

超声裂开法液体剪切作用

X-press法 固体剪切作用

可达较高裂开率，可大规模操作，不适合丝状菌和革兰氏阳

对酵母菌效果较差，裂开过程升温猛烈，不适合大规模操作裂开率高，活性保存率高，对冷冻敏感目的产物不适合

酶溶法酶分解作用具有高度专一性，条件温存，浆液易分别，溶酶价格高，通用性差化学渗透法转变细胞膜的渗透性具确定选择性，浆液易分别，但释放率较低，通用性差渗透压法 渗透压猛烈转变裂开率较低，常与其他方法结合使用

冻结溶化法反复冻结-溶化枯燥法转变细胞膜渗透性第四章沉淀法

蛋白质的外表特征

裂开率较低，不适合对冷冻敏感目的产物条件变化猛烈，易引起大分子物质失活

蛋白质组成

20种氨基酸构成的两性高分子电解质，包括疏水性氨基酸和亲水性氨基酸蛋白质折叠趋势

疏水性氨基酸：向内部折叠的趋势

亲水性氨基酸：分布于蛋白质外外表的趋势结果

在蛋白质三维构造中仍会有局部疏水性氨基酸残基暴露于外表，在蛋白质外表形成确定的疏水区

蛋白质外表由不均匀分布的荷电基团形成荷电区、亲水区和疏水区构成。

蛋白质的溶解行为是一个独特的性质，由其组成、构象以及分子四周的环境所打算。一般而言，小分子蛋白质比起在化学上类似的大分子蛋白质更易溶解。

盐析法的原理和影响因素防止蛋白质分散沉淀的屏障

⑴蛋白质四周的水化层可以使蛋白质形成稳定的胶体溶液。

⑵蛋白质分子间静电排斥作用。〔存在双电层〕盐析类型〔Ks盐析、β盐析〕

定义：蛋白质在高离子强度的溶液中溶解度降低、发生沉淀的现象称为“盐析”。盐溶：低盐状况，盐离子强度的增高，蛋白质溶解度增大。

盐析：高盐，盐离子强度增加，蛋白质溶解度减小。

盐析法原理：形成离子对，局部中和了蛋白质的电性，排斥作用减弱而能相互靠拢，聚拢起来。中性盐的亲水性比蛋白质大，使蛋白质脱去了水化膜，使其沉淀

㏒S=β－ＫsＩ

式中S——蛋白质的溶解度，g/L;I－一离子强度等于I=1/2∑mizi2;mi——离子i的摩尔浓度；Zi——所带电荷；

β——常数，与盐的种类无关，但与温度、pH和蛋白质种类有关;Ks——盐析常数，与温度和PH无关，但与蛋白质和盐的种类有关。

⑴在确定的pH值及温度条件下，转变盐的浓度〔即离子强度〕到达沉淀的目的，称为“Ｋs”分级盐析法。〔Ks盐析：固定pH,温度，转变盐浓度〕

⑵在确定的离子强度下，转变溶液的pH值及温度，到达沉淀的目的，称为“β”分级盐析法。〔β盐析：固定离子强度，转变pH及温度。〕

有机溶剂沉淀的根本原理和影响因素

定义向水溶液中参与确定量亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分别纯化方法。

原理1〕参与有机溶剂后，会使水溶液的介电常数降低，导致蛋白