食品理化检验维生素的测定.ppt

（2）定量方法标准曲线法：配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。第27页,共56页，星期六，2024年，5月(3).操作步骤①试样处理样品匀浆（或粉碎）于低温冰箱中冷冻保存。②提取1)水解2)酶解称样三角瓶高压水解盐酸溶液调pH值乙酸钠溶液酶解淀粉酶定容第28页,共56页，星期六，2024年，5月吸附剂采用的是人造浮石。将提取液加入人造浮石交换柱中，VB1被吸附上去，吸附上去后，再用热水淋洗，洗去杂质，最后用热的酸性氯化钾（25%KCl-HAC）把VB1洗脱下来，这样就得到纯VB1。样品热水酸性氯化钾收集酸性氯化钾定容③净化第29页,共56页，星期六，2024年，5月④氧化静置→过滤→脱水反应瓶编号标准A瓶标准B瓶样品A瓶样品B瓶加标准液或样品液标准液5ml标准液5ml样品液5ml样品液5ml加氢氧化钠3ml——3ml——加碱性铁氰化钾——3ml——3ml加正丁醇10ml10ml10ml10ml第30页,共56页，星期六，2024年，5月⑤荧光强度测定(通过荧光分光光度计可以测得)激发波长365nm；发射波长435nm；激发波狭缝5nm；发射波狭缝5nm。（4）方法说明本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但不适用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响硫色素荧光物质的样品；酸解、水解的目的：使结合型的VB1成为游离型的；紫外线会破坏硫色素，所以硫色素形成后，反应瓶要用黑布遮盖或在暗室中进行荧光测定，并且要迅速测定；第31页,共56页，星期六，2024年，5月维生素B2又称核黄素测定方法主要有：微生物法、荧光法、HPLC法GB/T5009.85-2003荧光法（第一法）微生物法（第二法）（三）维生素B2的测定第32页,共56页，星期六，2024年，5月荧光法测维生素B21.原理核黄素在440～500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。在波长525nm下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S2O4)，将核黄素还原为无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。为使VB2游离出来，采用需经酸解和酶解为消除干扰，试样通过氧化处理和柱层析处理。第33页,共56页，星期六，2024年，5月2.测定步骤（1）样品提取称样三角瓶高压水解盐酸溶液调pH值氢氧化钠溶液酶解淀粉酶定容蛋白酶第34页,共56页，星期六，2024年，5月（2）氧化去杂样品提取液具塞试管水双氧水冰乙酸高锰酸钾氧化去杂褪色标准液按相同方法进行第35页,共56页，星期六，2024年，5月（3）柱层析样品液水丙酮-乙酸-水混合液水收集洗脱液定容*标准液按相同操作进行第36页,共56页，星期六，2024年，5月（4）荧光测定激发光波长440nm，发射光波长525nm，测量样品管及标准管的荧光值。待样品及标准的荧光值测量后，在各管的剩余液中加0.1mL20%低亚硫酸钠溶液，立即混匀，在20s内测出各管的荧光值，作为各自的空白值。第37页,共56页，星期六，2024年，5月3.计算X：样品中核黄素含量，mg/100gA：试样荧光值B：试样空白荧光值C：标准荧光值D：标准空白荧光值m：样品质量，gm1：标准管中核黄素含量μgf：稀释倍数100/1000：样品核黄素含量的换算系数第38页,共56页，星期六，2024年，5月维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸;广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条件下又是一种抗氧化剂。（三）维生素C的测定第39页,共56页，星期六，2024年，5月维生素C具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性；进一步水解则生成2，3