脑脊液外泌体的分离与检测运用于自身免疫性脑炎分型的诊断(最终版)).pptxVIP

脑脊液外泌体的分离检测运用于神经元表面抗体综合征的诊断

;自身免疫性脑炎：机体对神经元抗原成分发生异常免疫反应,而累及局部或广泛的中枢神经系统的疾病

临床特点：以急性或亚急性发作的癫痫、认知障碍、精神症状

辅助检查：表现为一侧或双侧颞叶T2/FLAIR高信号。脑脊液检查常见轻、中度的淋巴细胞增多、蛋白增加，50%-60%可见寡克隆带

注意：特异性抗体检测及肿瘤的筛查对于诊断尤为重要;二、分类;三、病例一;三、病例一;三、病例二;三、病例二;四、进一步诊断;明确诊断;早期NMDA受体抗体检测：通过将抗体血清或脑脊液与冰冻大鼠脑切片共同孵育，再通过体外细胞免疫荧光发现抗体与NMDA受体存在共定位，从而确定抗体的存在

目前用于临床的检测方法：以细胞为基础的间接免疫荧光抗体。即在HEK-293细胞中表达NR1亚基，再与患者标本孵育后用荧光标记的山羊抗人IgG抗体进行染色，从而确定标本中抗体是否存在。通过对标本进行梯度稀释,可以半定量区别标本中抗体的滴度水平

存在问题：由于NR1亚基的抗原特性与构象有关，对抗NMDA受体抗体的检测无法脱离细胞培养，需要较高的检测条件。这给普通医院开展检测造成了很大困难。当检测结果出现血清学阳性而脑脊液阴性时，需进一步行组织切片及神经元培养鉴定，确诊面临更大的困难;外泌体(exosomes)是一种细胞主动分泌的大小均一，直径为40～100nm的脂质双分子层结构囊泡，可由不同细胞类型脱落释放，在大多数体液如外周血、尿液、唾液、腹水、羊水、乳汁、脑脊液、关节液、支气管肺泡灌洗液等体液中可检测到

外泌体可携带多种可携带多种反映细胞来源的组织/细胞类型特异性蛋白、脂质、mRNA、miRNA，参与细胞通讯、免疫反应、细胞迁移、血管新生及肿瘤细胞生长等过程

自免性脑炎的诊断核心是特异性自身抗体的检测，但目前的检测方法仍存在很多问题，寻找一种特异性更高的检测方法已成必然趋势。而脑脊液外泌体因其含多种反映细胞来源的组织/细胞类型特异性蛋白，成为当前研究热点

;研究流程图;患者临床资料;辅助检查结果;抗NMDA受体脑炎;间接免疫荧光脑脊液相关抗体检测;外泌体中NMDAR抗体检???;外泌体中GABABR抗体检测;抗NMDA受体脑炎患者脑脊液外泌体孵育神经元;抗NMDA受体脑炎患者脑脊液外泌体小脑皮层注射;结果;;讨论;自身免疫性脑炎诊断标准;自身抗体阴性但可能的自身免疫性脑炎诊断标准;谢谢！