临床检验基础 尿液化学检验(一).ppt

*尿蛋白定性试验

2.磺基水杨酸法(SSA)

过筛实验，干化学法检测尿蛋白的参考方法【原理】在略低于蛋白质等电点的酸性环境中，尿蛋白氨基带正电荷，与带负电荷的磺基水杨酸根相结合，形成不溶性蛋白盐沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白质含量。【质量控制】1.尿液标本必须新鲜。混有生殖系统分泌物时可致假阳性。2.应用青霉素钾盐、庆大霉素、磺胺、PAS及含碘造影剂等，或高浓度尿酸、草酸盐、粘蛋白等作用下可呈假阳性反应，但加热煮沸后消失。3.如PH9或3可致假阴性，需调整尿液pH至5~6。*【结果判断】阴性（－）：不显混浊，尿液外观仍清晰透明。可疑（±）：轻微混浊，隐约可见，含蛋白量约为0.05-0.20g/L。阳性（＋）：明显白色混浊，但无颗粒出现，含蛋白量约为0.30g/L。（2＋）：稀薄乳样混浊，出现颗粒，含蛋白量约为1.0g/L。（3＋）：乳浊，有絮片状沉淀，含蛋白量约为3.0g/L。（4＋）：絮状混浊，有大凝块下沉，含蛋白量≥5.0g/L。*尿蛋白定性试验

3.干化学试带法健康普查【原理】利用pH指示剂的蛋白质误差（proteinerror）原理——在一定条件下（pH3.2），指示剂阴离子与蛋白质结合生成复合物，引起指示剂的进一步电离，超过尿液的缓冲能力而发生颜色变化。颜色的变化与蛋白质含量成正比。【质量控制】1.尿液标本必须新鲜，变质的尿液会影响尿pH；大剂量青霉素可呈假阴性；大剂量洗必泰可呈假阳性。2.反应时间和标本量严格按照试带法的操作说明来进行，并强调使用标准化的试带。3.对清蛋白灵敏，对球蛋白的灵敏度仅为清蛋白的1/100-1/50，与血红蛋白、肌红蛋白、本周蛋白基本不反应。*不同PH值尿液，尿蛋白结果

??????PH?????3.0??5.0???7.0????8.0????9.0

????白蛋白??70??100??100???100????200

????注：双缩脲法定值100mg/dL尿液过酸（PH4）或过碱（PH8），超过试纸缓冲能力，可出现假阴性或假阳性*青霉素对尿蛋白干化学法的干扰*尿液蛋白质定性检验的方法学评价方法评价加热乙酸法尿液蛋白质检验的经典方法。特异性高、干扰因素少，灵敏度较低为0.15g/L。能使所有蛋白质发生沉淀反应，虽操作繁琐，但结果准确。常作为确证试验磺基水杨酸法操作简便、快速。与清蛋白、球蛋白、本周蛋白均可发生反应。灵敏度高，为0.05-0.10g/L，因而有一定的假阳性。作为干化学法检测尿蛋白的参考方法，手工法尿蛋白定性试验的过筛试验干化学法本法既可肉眼观察，又可用于尿液自动分析仪。对清蛋白灵敏，对球蛋白的灵敏度仅为清蛋白的1/100-1/50，与血红蛋白、肌红蛋白、本周蛋白基本不反应。本法快速、简便、易于标准化，适用于健康普查，尤其是肾脏疾病的筛检，但不适用于其疗效观察和判断预后。**1.比色法（双缩脲法）钨酸可沉淀尿液中的蛋白质，后者复溶于双缩脲试剂中，其碱性的Cu2+与蛋白质的肽键形成紫色的复合物，呈色的深浅与尿蛋白的含量成正比。双缩脲法是测定尿蛋白总量的常规参考方法。显色稳定、重复性好，对白、球蛋白的反应灵敏度较一致（100~150mg/l），但灵敏度低。尿蛋白定量试验*尿蛋白定量试验2.沉淀法利用蛋白质与生物碱试剂结合，在酸性条件下形成沉淀物，观察沉淀物的量，以估计蛋白质的含量。费时、准确性差，已淘汰。3.比浊法（磺基水杨酸-硫酸钠双浊法）：虽操作简便，但线性范围窄，受温度、pH、时间、混匀方式等多种因素影响，故重复性差。磺基水杨酸还可与药物（磺胺、青霉素、有机碘等）及多肽类物质结合导致假阳性，故目前已少用。*4.染料结合法（1）丽春红S法:蛋白质和丽春红S结合后，同时被三氯乙酸沉淀，在碱性溶液中沉淀物溶解呈紫色，呈色深浅与蛋白质含量成正比。（2）考马斯亮蓝法5.免疫测定法6.尿蛋白电泳法尿蛋白定量试验*尿液蛋白质定量检验的方法学评价方法评价沉淀法费时、准确性差，已淘汰比浊法操作简便，对清蛋白、球蛋白有相同的灵敏度，但线性范围窄，影响因素多（温度、pH、时间、混匀方式等），因而精密度低比色法双缩脲比色法为蛋白质定量测定的经典方法染料结合法考马斯亮蓝法和邻苯三酚红钼酸络合法灵敏度高、操作简便快速、呈色稳定、干扰因素少，但易污染。丽春红S法需用三氯乙酸沉淀，操作繁琐，离心沉淀不完全也影响结果免疫法及电泳法具有更高的灵敏度和特异性，临床普遍采用的新技术*1、生理性蛋白尿：功能性、直立性、摄入性、偶然性、老年性、妊娠性蛋白尿2．病理性蛋白尿：可分为肾前性、肾性及肾后性蛋白