紫外可见分光光度法（仪器分析课件）.pptx

紫外（UV）-

可见（VIS）分光光度法;;;;比色法以日光为光源，靠目视比较颜色深浅。

最早的记录是1838年兰帕迪乌斯在玻璃量筒中测定钻矿中的铁和镍，用标准参比溶液与试样溶液相比较。

1846年雅克兰提出根据铜氨溶液的蓝色测定铜。

随后有赫罗帕思的硫氰酸根法测定铁；奈斯勒法测定氨；苯酚二磷酸法制定硝酸根；过氧化氢法测定钍；亚甲基蓝法测定硫化氢；磷硅酸法测定二氧化硅等。;基于物质光化学性质而建立起来的分析方法称之为光化学分析法。

分为:光谱分析法和非光谱分析法。

光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通过测量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法。;概念：紫外可见分光光度法是基于物质分子对200-780nm区域内不同波长的单色光的吸收程度不同对物质进行定性分析和定量分析的方法。;（1）灵敏度高

分光光度法适用于微量和痕量组分的分析，可以测定组分的浓度下限（最低浓度）可达10-5～10-6mol·L－1，相当于含量为0.001%～0.0001%的微量组分。

（2）准确度较高

分光光度法的相对误差为2～5%，其准确度虽不如滴定分析法及称量分析法，但对微量组分的分析而言，基本满足准确度的要求。如一滴0.02mol·L?1的KMnO4溶液以水稀释至100mL时，仍可得到明显的适于比色分析的颜色。但这滴溶液所含的KMnO4的量只相当于约0.06mg金属锰。显然，该含量用化学分析法如滴定分析法及称量分析法是很难得到准确结果的。

（3）选择性好

近年来由于新显色剂和掩蔽剂的不断出现，提高了选择性，通过选择适当的测定条件，可不分离干扰物质，直接测定混合体系中各组分的含量。;（4）操作简便、快速

比色法及分光光度法的仪器设备简单，操作简便。进行分析时，试样处理成溶液后，一般只经过显色和比色两个步骤，即可得到分析结果。

（5）应用广泛

几乎所有的无机离子和有机化合物都可直接或间接地用分光光度法进行测定。在化工、医学、生物学等领域中常用来剖析天然产物的组成和结构、测定化合物的含量及进行生化过程的研究等。不仅用于组分定性、定量分析，还可用于化学平衡及配合物组成的研究。;;波动性;光谱区间;单色光,复合光;紫外（UV）-

可见（VIS）分光光度法;;;;(AbsorptionSpectra);定性分析基础;紫外（UV）-

可见（VIS）分光光度法;;;;透光率(透射比,Transmittance);吸光度(Absorbance);;A＝lg（I0/It)=εbc

式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度；

b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位；

c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L－１；

ε：摩尔吸光系数，单位L·mol－１·cm－１；;物理意义

单位浓度的溶液液层线厚度为1cm时，在一定波长下测得的吸光度。;K??;朗伯-比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据，广泛应用于紫外、可见、红外和原子吸收的测量。

该定律不仅适用于溶液，也适用于其它均匀、非散射的吸光物质（包括气体和固体）。

对于多组分体系，若体系中各组分间无相互作用，则各组分的吸光度具有加和性。设体系中有n个组分，则在任一波长?处的吸光度为各组分的吸光度的和：

A=A1+A2+…+Ai+…+An=?1bc1+?2bc2+…+?ibci+…+?nbcn;;;紫外（UV）-

可见（VIS）分光光度法;;;;;光源;光源：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。

紫外：氢、氘灯----发射185～400nm的连续光谱

可见：钨灯--辐射波长范围在320～2500nm;单色器：将光源发射的复合光分解成连续光谱并可从中选出任一波长单色光的光学系统。;;单色器的核心部分是色散元件，起分光的作用。

色散元件主要是棱镜和光栅。。;棱镜有玻璃和石英两种材料。

玻璃棱镜只能用于可见光域内。

石英棱镜可用于紫外、可见和近红外三个光域。

光栅可用于紫外、可见及红外光域。;吸收池：又叫比色皿，用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度的器件。;吸收池（也叫比色皿、样品池）有玻璃和石英两种。

玻璃吸收池只能用于可见光域内。

石英吸收池可用于紫外、可见和近红外三个光域。

常用的吸收池规格有：0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm、5.0cm等。;拿：只能捏两侧的毛玻璃面，不可接触光学面；

洗：依次用自来水、溶剂、待装液各润洗3次；

装：吸收池高度的2/3～3/4；

4.擦：先用滤纸吸干外壁，然后用擦镜纸或丝绸擦干；

5.查：内部溶液无气泡，光学面外壁无垃圾；

6.放：